بیست و سومین کنگره گیاهپزشکی ایران

اولین گزارش از Phaeoacremonium venezuelense و Neoscytalidium hyalinum از درخت اسکنبیل (Calligonum amoenum) درایران

نویسندگان

¹سجاد نظم الدینی؛ ²حمید محمدی؛ ³محمد کاظم زاده

¹گروه گیاهپزشکی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه شهید باهنر کرمان، کرمان

²کرمان، بلوار 22 بهمن، میدان پژوهش، دانشگاه شهید باهنر، دانشکده کشاورزی، بخش گیاهپزشکی

³رشت- استقامت- کوچه سلمان- ساختمان کوثر- کد پستی 4144873414

چکیده

در طول اردیبهشت ماه 1395 تا مرداد ماه سال 1396 یک بررسی جهت تعیین وضعیت و پراکندگی بیمارگرهای شاخه و تنه بر روی برخی از درختان بومی در استان کرمان انجام گردید. از شاخه درختان بومی مختلف که دارای نشانه های بیماری به صورت زردی، برگریزی، سرخشکیدگی، شانکر، صمغ زدگی و زوال بودند نمونه برداری انجام و نمونه ها به آزمایشگاه منتقل شدند. جهت مشاهده تغییر رنگ داخلی بافت چوب، از نمونه های جمع آوری شده برش هایی به شکل طولی و عرضی تهیه گردید. در مرحله بعد قطعات کوچکی از بافت چوب (به اندازه 3 تا 5 میلی متر) و از مرز بین بافت سالم و آلوده برش داده شد و بعد از ضد عفونی سطحی (با هیپوکلریت سدیم نیم درصد به مدت 2 تا 3 دقیقه)، شستشو در آب استریل و خشک کردن بر روی دستمال کاغذی استریل بر روی محیط کشت عصاره سیب زمینی-دکستروز-آگار (PDA) و یا عصاره مالت-آگار (MEA) دارای اسید لاکتیک (3 میلی لیتر در لیتر) قرار داده شدند. همه تشتک های پتری در دمای 25 درجه سانتیگراد و تاریکی به مدت 5-12 روز نگهداری شدند. در مرحله بعد قرص های میسلیومی از پرگنه های در حال رشد انتخاب و به محیط کشت جدید PDA منتقل شدند. خالص سازی جدایه های قارچی بدست آمده به روش تک اسپور و یا نوک ریسه کردن انجام شد. همه جدایه ها ابتدا بر اساس شکل ظاهری پرگنه و ویژگی های میکروسکوپی شناسایی شدند. تایید شناسایی ریخت شناختی جدایه های انتخاب شده نیز به روش مولکولی و با تجزیه و تحلیل ترادف بخشی از ژن های بتا توبولین (BT)، اکتین (ACT) و ژن بسط دهنده نسخه برداری (EF-1α) که به ترتیب با آغازگرهای T1/Bt2b، ACT-512F/ACT-783R و EF1-728F/EF1-986R تکثیر شدند، صورت گرفت. در این بررسی 24 جدایه قارچی از درختان اسکنبیل (Calligonum amoenum) که دارای شانکر تنه و شاخه بودند جداسازی گردید. جدایه ها بر اساس ویژگی های ریخت شناختی و مولکولی در دو گونه Phaeoacremonium venezuelense (13 جدایه) و Neoscytalidium hyalinum (11 جدایه) قرار گرفتند. این مطالعه اولین گزارش از دو گونه گفته شده بر روی درخت C. amoenum در دنیا محسوب می گردد. این تحقیق همچنین اولین گزارش از گونه P. venezuelense برای میکوبیوتای ایران می باشد.

کلیدواژه ها

استان کرمان؛ بیمارگرهای قارچی شاخه و تنه؛ روش های ریخت شناختی و مولکولی

موضوعات

رستیها-قارچ شناسی

Title

First report of Phaeoacremonium venezuelense and Neoscytalidium hyalinum from Calligonum amoenum in Iran

Authors

sajjad nazmoddinni, Hamid Mohammadi, mohammad kazemzadeh chekusary

Abstract

Between April 2016 and July 2017, a survey was conducted to determine the status and distribution of fungal trunk pathogens on some native trees in Kerman province. Samples were collected from branches of various affected native trees showing yellowing, defoliation, dieback, canker, gummosis and decline and transferred to the laboratory. Longitudinal and transverse sections were made from symptomatic branches to observe internal wood discoloration. Small (3–5 mm) wood pieces from the edges of necrotic lesions were cut, surface disinfested (2-3 min in 0.5 % sodium hypochlorite solution), washed in sterile distilled water, dried on sterile paper and placed onto malt extract agar (MEA) or potato dextrose agar (PDA) plates complemented with lactic acid (3.0 ml/L). All plates were incubated at 25°C in the dark for 5-12 days. Mycelia plugs from young growing colonies were transferred to fresh plates of PDA. Fungal isolates were purified using the single spore or hyphal tip technique. All isolates were identified phenotypically according to colony appearance and microscopic structure characteristics. Accuracy of morphological identification for representative isolates were confirmed by analysis of partial β-tubulin (BT), actin (ACT) and translation elongation factor 1α (EF-1α) gene sequences amplified using primers T1/Bt2b, ACT-512F/ACT-783R and EF1-728F/EF1-986R, respectively. In this survey, 24 fungal isolates were obtained from Calligonum amoenum trees showing trunk and branch canker. These isolates were identified as Phaeoacremonium venezuelense (13 isolates) and Neoscytalidium hyalinum (11 isolates) based on morphological and molecular characters. This is the first report of these two species on C. amoenum in the world. This study also represents the first record of P. venezuelense for mycobiota of Iran.

Keywords

Kerman province, fungal trunk pathogens, morphological and molecular methods