تعیین گروه های آناستوموزی Rhizoctonia solani مرتبط با پوسیدگی ریشه و طوقه فلفل در ارومیه
XML
نویسندگان
بلوار دانشگاه(جاده سرو)، دانشگاه ارومیه، دانشکده کشاورزی، گروه گیاهپزشکی
چکیده
فلفل (Capsicum annuum) یکی از سبزیجات مهمی است که در اغلب مناطق استان آذربایجان‌ غربی کشت می‌شود. آفات و بیماری-های متعددی موجب کاهش کیفیت و کمّیت این محصول در نقاط مختلف جهان می‌شوند که پوسیدگی ریشه و طوقه‌ی ناشی از Rhizoctonia solani به عنوان یکی از مهم‌ترین بیماری‌های مهم فلفل در نظر گرفته می‌شود. به منظور شناسایی گروه‌های آناستوموزی ریزوکتونیاهای مرتبط با این بیماری در مزارع اطراف ارومیه، در طی ماه‌های مرداد تا آبان سال ۱۳۹۵، نمونه‌برداری از گیاهان فلفل دارای علایم بیماری در مزارع 12 منطقه انجام گرفت. پس از شست‌و‌شو و ضدعفونی با هیپوکلریت سدیم 5/0 درصد، قطعات کوچکی از ریشه و طوقه از حاشیه قسمت‌های پوسیده در محیط کشت Potato dextrose agar (PDA) حاوی آنتی‌بیوتیک استرپتومایسین کشت شدند. پس از گذشت 48 ساعت، ریسه‌های رشد کرده از بافت‌های گیاهی به آب-آگار دو درصد انتقال یافتند و سپس به روش نوک ریسه خالص‌سازی شدند. با بررسی اولیه مشخصات ریخت‌شناختی ریسه‌ها و پرگنه‌ها در جدایه‌های خالص‌سازی شده، تعداد 47 جدایه R. solani شناسایی شد. برای تعیین گروه‌های آناستوموزی، ابتدا جدایه‌های ریزوکتونیا دو به دو مقابل هم روی لام پوشیده شده با PDAکشت داده شدند و پس از ۱۲ ساعت نگهداری در محفظه مرطوب و بررسی پیوند ریسه‌های جدایه‌ها در زیر میکروسکوپ، جدایه‌های دارای گروه آناستوموزی مشابه مشخص گردید. سپس یک جدایه از هر گروه انتخاب و ناحیه‌ی ITS1-5.8S-ITS2ریبوزومی تکثیر و توالی‌یابی گردید. در کلّ 47 جدایه R. solani از مزارع نه منطقه جداسازی گردید. نتایج تجزیه‌های فیلوژنتیکی نشان داد که جدایه‌ها متعلق به سه گروه آناستوموزی AG-4، AG-5 و AG-K بودند که AG-K دوهسته‌ای و دو گروه دیگر جزو ریزوکتونیاهای چندهسته‌ای هستند. در بین نمونه‌های مورد بررسی، 39 جدایه متعلق به AG-4، در مزارع هفت منطقه ردیابی شد و بنابراین گروه آناستوموزی غالب در مزارع فلفل اطراف ارومیه بود. جدایه‌های دو گروه دیگر با پراکنش و فراوانی کمتری یافت شدند به طوری که شش جدایه AG-5 در چهار منطقه و دو نمونه AG-K فقط در یک منطقه ردیابی شد.
کلیدواژه ها
موضوعات
 
Title
Determination of Rhizoctonia solani anastomosis groups associated with root and crown rot in Urmia
Authors
samaneh asghari
Abstract
Pepper (Capsicum annuum) is one of the most important vegetables that is cultivated in the most regions of West Azarbaijan province. Several pests and diseases reduce the quality and quantity of this crop worldwide and, root and crown rot caused by Rhizoctonia solani is considered as one of the most important diseases of pepper. In order to identify the anastomosis groups of Rhizoctonia isolates associated with this disease in the fields located in vicinity of Urmia, pepper plants showing the disease symptoms were collected from various fields in 12 regions in July to October, 2016. After washing with tap water and disinfection with 0.5% sodium hypochlorite, small pieces of root and crown from the margins of rotted parts were cultured on PDA containing streptomycin. After 48 hours, hyphae growing from plant tissues were transferred onto 2% water-agar and were then purified using hyphal tip method. In preliminary examination of morphological and colony characteristics of purified isolates, 47 R. Solani isolates was identified. To determine the anastomosis groups, pairs of Rhizoctonia isolates were first cultured on opposite sides on glass slides covered with a thin layer of PDA and after 12 hours incubation in moist chamber, isolates with the same anastomosis group were determined by examining the hyphal fusion of the isolates under microscope. Then, one isolate from each anastomosis group was selected and ribosomal ITS1-5.8S-ITS2 region of these isolates was amplified and sequenced. Overall, 47 R. solani isolates were collected from nine regions. Results of phylogenetic analyses indicated that the isolates were belonged to the three anastomosis groups i.e. AG-4, AG-5 and AG-K that AG-K is binucleate and the other two groups are multinucleate. Among the studied samples, 39 AG-4 isolates were detected in seven regions and, therefore, it was dominant anastomosis group in the pepper fields located in vicinity of Urmia. The isolates of the other two anastomosis groups were found in smaller geographical areas and lower frequencies, as six AG-5 and two AG-K isolates were detected in four and one regions, respectively.
Keywords
Molecular detection, Multinucleate Rhizoctonia, Binucleate Rhizoctonia