بیست و سومین کنگره گیاهپزشکی ایران

گزارش باکتری Erwinia amylovora، عامل بیماری آتشک درختان به در استان فارس

نویسندگان

¹شیراز.منطقه باجگاه.دانشکده کشاورزی.بخش گیاهپزشکی

²بخش گیاهپزشکی.دانشکده کشاورزی.دانشگاه شیراز

چکیده

بیماری آتشک یکی از مخرب‌ترین بیماری‌های درختان میوه دانه‌دار به شمار می‌آید. باکتری Erwinia amylovora عامل این بیماری متعلق به خانواده Entrobacteriaceae، خسارت زیادی را سالانه به گونه‌های مختلف خانواده Rosaceaوارد می‌کند. عامل این بیماری دارای دامنه میزبانی وسیع و گسترش جهانی می‌باشد. در تابستان سال 96 طی بازدید به عمل آمده در منطقه کودیان در روستای خان زنیان در استان فارس، نمونه‌های مشکوک به عامل بیماری آتشک در درختان به مشاهده شد. نمونه‌ها جمع آوری و جهت شناسایی به آزمایشگاه منتقل شدند. جداسازی و خالص‌سازی باکتری روی محیط SNA (Sucrose Nutrient Agar) انجام شد. کلیه آزمون‌های بیوشیمیایی بر روی جدایه‌ها در آزمایشگاه بر طبق Schaad et al.(2001) انجام شد. بر اساس خصوصیات مرفولوژیکی و آزمون‌های بیوشیمیایی عامل بیماری متعلق به خانواده Entrobacteriaceae تشخیص داده شد. کلیه جدایه‌ها قادر به ایجاد واکنش فوق حساسیت (HR) در توتون 24 ساعت بعد از مایه‌زنی بودند. آزمون بیماری‌زایی بر روی شاخه‌های جوان و میوه‌های نارس به انجام شد. به این منظور از کشت 48 ساعته باکتری روی محیط NA (Nutrient Agar) استفاده شد. جدایه‌ها با سوسپانسیونی معادل غلظت تقریبی CFU/ml 1×107 با استفاده از سرنگ سترون تزریق شدند. نمونه‌های کنترل با استفاده از آب مقطر سترون مایه‌زنی شدند. بعد از مایه‌زنی، شاخه‌های جوان در دمای 27 درجه سانتی‌گراد و رطوبت نسبی 70 تا 90 درصد نگهداری شدند. میوه‌ها در دمای 27 تا 29 درجه سانتی‌گراد در شرایط اتاقک مرطوب نگهداری شدند. پس از هشت روز، لکه‌ها و زخم‌های تیره روی شاخه‌ها ظاهر شدند. روی میوه‌ها، ترشحات باکتریایی و نقاط نکروز بعد از گذشت شش روز، مشاهده شد در حالی که در نمونه‌های کنترل هیچ گونه علایمی از بیماری ظاهر نشد. جداسازی مجدد از نمونه‌های بیمار به عمل آمد و باکتری مورد نظر با جمعیت بالا جداسازی شد. برای تأیید نتایج حاصل، از روش تعیین تعیین توالی ژنوم استفاده شد. به این منظور ژن‌های 16S rRNA و recA تعیین توالی شدند و درخت‌های فیلوژنتیکی مربوطه ترسیم شدند. نتایج تعیین توالی این ژن‌ها نشان داد که جدایه‌‌ها بیشترین شباهت را با باکتری E. amylovora در سطح تشابه 99 درصد دارند. از این رو به نظر می‌رسد که این اولین گزارش از باکتری E. amylovora از درختان به در خان زنیان، منطقه کودیان در استان فارس می‌باشد.

کلیدواژه ها

Entrobacteriaceae؛ Rosaceae؛ بیماریزایی و ژن

موضوعات

بیماریهای باکتریایی و فیتوپلاسمایی

Title

Occurrence of Fire Blight of Quince trees in Fars Province

Authors

nasim sedighian, S.Mohsen Taghavi

Abstract

Fire blight is one of the most destructive diseases of pome fruits worldwide. The causal pathogen, Erwinia amylovora, belongs to the family Enterobacteriaceae. It causes several damages on most species of family Rosaceae. It has worldwide geographic distribution and broad host rang. In summer of 2017, during the investigation undertaken in Khan Zenian, Kudian region in Fars province, suspicious samples were observed in quince trees. The samples were collected and brought to the laboratory for further analysis. Isolation and purification of bacteria was done on SNA (Sucrose Nutrient Agar) medium. All of biochemical tests were performed according to Schaad et al. (2001). Results of morphological and biochemical tests, demonstrated that the bacterium belongs to Enterobacteriaceae. Isolates were able to produce hypersensitive response (HR) after 24 h post inoculation on tobacco leaves. For pathogenicity test, a bacterial suspension was adjusted to approximately 1 × 107 CFU/ml from cultures grown on NA medium for 48 h. Young shoots and immature fruits were inoculated with the bacterial suspension using a sterile needle. Controls were injected with sterile distilled water. After inoculation, shoots were kept at 27°C and 70 to 90% relative humidity. Fruits were kept in a mist chamber at 27 to 30°C. Dark lesions were observed eight days after inoculation on the inoculated shoots. Necrotic spots and oozing of bacterial exudates were observed after six days on fruits. No symptoms were observed on the controls. The bacterium was re-isolated from the lesions and high population of the bacteria was obtained. For confirmation the results, 16S rRNA and recA genes, were sequenced and phylogenetic trees were constructed. The results showed that the strains had highest similarity (%99) with E. amylovora. To our knowledge, this is the first report of bacterial fire blight of quince caused by E. amylovora in Khan Zenian, Kudian region in Fars province in Iran.

Keywords

: Entrobacteriaceae, Gene, Pathogenicity and Rosaceae