جداسازی و شناسایی قارچ های همراه با بیماری های شاخه و تنه درختان گردو (Juglans regia L.) در استان کرمان
XML
نویسندگان
1کرمان- بلوار جمهوری- بلوار پزشک- کوی بهارستان- بلوک 40 شرقی- واحد 200
2کرمان، بلوار 22 بهمن، میدان پژوهش، دانشگاه شهید باهنر، دانشکده کشاورزی، بخش گیاهپزشکی
3بخش گیاهپزشکی٬ دانشکده کشاورزی٬ دانشگاه شیراز٬ شیراز٬ ایران
چکیده
درخت گردو یکی از مهمترین درختان میوه در ایران محسوب می گردد. این گیاه چوبی تحت تأثیر بیمارگرهای مختلف شاخه و تنه قرار می گیرد که باعث کاهش عملکرد محصول آن و افزایش هزینه های سالیانه تولید می شوند. در 10 سال اخیر درختان گردو با نشانه های زوال در بسیاری از مناطق کشت این محصول در استان کرمان مشاهده و گزارش شده اند. در بسیاری از موارد با تهیه برش های عرضی از شاخه و تنه این درختان تغییر رنگی به صورت قهوه ای و یا سیاه رنگ در بافت چوب مشاهده می شود. بنابراین هدف از انجام این مطالعه شناسایی ریخت شناختی و مولکولی گونه های قارچی همراه با این نوع از نشانه های بیماری بود. برای این منظور، بین اردیبهشت ماه سال 1394 تا شهریور ماه 1396 بررسی های متعددی بر روی درختان گردو در مناطق مختلف استان کرمان انجام شد. در طول این بررسی از تنه و شاخه درختان که دارای نشانه های بیماری به شکل زردی، شانکر شاخه و تنه، سرخشکیدگی و نکروز داخلی بافت چوب بودند نمونه برداری گردید. نمونه های دارای نشانه بیماری به قطعات کوچک (4 × 4 میلی متر) برش داده شدند و با هیپوکلریت سدیم به مدت دو دقیقه گندزدایی و پس از دو مرتبه شستشو با آب استریل بر روی محیط کشت عصاره سیب زمینی-دکستروز-آگار (PDA) کشت داده شدند. تشتک های پتری در دمای °C25 و تاریکی نگهداری و همه پرگنه های قارچی رشد کرده به محیط کشت جدید منتقل شدند. قبل از شناسایی به روش ریخت شناختی و مولکولی، از همه جدایه ها کشت های خالص تهیه گردید. جدایه ها ابتدا بر اساس ویژگی های پرگنه و مشاهدات میکروسکوپی شناسایی و گروهبندی شدند. عمل استخراج کل DNA برای جدایه های منتخب از هر گروه انجام و با تکثیر و تعیین ترادف ناحیه ITS با استفاده از آغازگرهای ITS1 و ITS4، شناسایی جدایه ها در سطح گونه مورد تأیید قرار گرفت. بر اساس ویژگی های ریخت شناختی و مقایسه ترادف های DNA پنج گونه شامل Eutypella vitis (شش جدایه)، Cryptosphaeria pulmanesis (پنج جدایه)، Sporendocladia bactrospora (10 جدایه)، Cosmospora viridescens (20 جدایه) و Paraconiothyrum hakeae (سه جدایه) از درختان گردو دارای نشانه های بیماری جداسازی و شناسایی گردید. بر اساس داده های موجود این مطالعه اولین گزارش از E. vitis، S. bactrospora، C.viridescens و P. hakeae بر روی درخت گردو در دنیا است.
کلیدواژه ها
موضوعات
 
Title
Isolation and identification of fungi associated with trunk diseases of walnut (Juglans regia L.) trees in Kerman province
Authors
Mahboobeh Sohrabi, Hamid Mohammadi, Zia Banihashemi
Abstract
Walnut (Juglans regia L.) is an important fruit trees in Iran. This woody plant is affected by various fungal trunk pathogens that reduce crop yields and increase annual production costs. In the last 10 years, English walnut trees with decline symptoms have been observed and reported in several areas in Kerman province. In the most cases a brown to black wood discoloration of internal wood tissues was observed in cross-sections of affected branches and trunks. Therefore, the objective of this study was to identify fungal species associated with these symptoms based on molecular and morphological methods. For this purpose, several field surveys were conducted on walnut trees in different areas of Kerman province between May 2015 and September 2017. Wood samples were collected from trunk and branches of trees showing disease symptoms including yellowing, branch and trunk cankers, dieback and internal wood necrosis. Symptomatic wood tissues were cut (4×4 mm) and surface disinfested with sodium hypochlorite solution for two min, washed twice with sterile distilled water and were plated on potato dextrose agar (PDA) plates. PDA plates were incubated at 25 °C in the dark and all fungal colonies were transferred to a fresh medium. Pure fungal colonies were obtained for all isolates prior to morphological and molecular identification. Isolates were first identified based on colony characteristics and microscopic observations. Total genomic DNA from representative isolates of each group was extracted and morphological identifications to species level were confirmed by sequence analysis of the internal transcribed spacer (ITS) nrDNA region using the primers ITS1 and ITS4. Based on morphological characteristics and DNA sequence comparisons, five fungal species including Eutypella vitis (six isolates), Cryptosphaeria pulmanesis (six isolates), Sporendocladia bactrospora (10 isolates), Cosmospora viridescens (20 isolates) and Paraconiothyrum hakeae (three isolates) were isolated from symptomatic walnut trees. To our knowledge this study represents the first report of E. vitis, S. bactrospora, C. viridescens and P. hakeae on English walnut trees in the world.
Keywords
Trunk pathogens, dieback, Canker, ITS