بیست و سومین کنگره گیاهپزشکی ایران

بررسی دامنه میزبانی و آلودگی مخلوط کدوییان به ویروس‌های کوتولگی زرد کدوییان(CYSDV)، زردی رگبرگ خیار (CVYV) و کوتولگی سبزرد هندوانه (WmCSV) در استان سیستان و بلوچستان

نویسندگان

¹مجید جعفری

؛ ²زهرا صادقی؛ ³سعید نصراله نژاد

¹سیستان و بلوچستان، سراوان، بلوار پاسداران، جنب فرمانداری، مجتمع آموزش عالی سراوان، گروه گیاهپزشکی

²گیاهپزشکی، دانشکده علوم زراعی، دانشگاه علوم کشاورزی و منابع طبیعی گرگان

³ایران- گرگان- میدان بسیج دانشکده کشاورزی پردیس گروه گیاهپزشکی

چکیده

بازدیدهای انجام شده از مزارع مختلف کدوییان از مناطق مختلف استان سیستان و بلوچستان نشان داد که علایم مختلفی از بیماری‌های ویروسی مانند زردی، کوتولگی بوته و بدشکلی برگها به فراوانی مشاهده می‌شود که مشابه به علایم سه ویروس کوتولگی زرد کدوییان (Cucurbit yellow stunting disorder virus, CYSDV) زردی رگبرگ خیار (Cucurbit vein yellow virus, CVYV) و کوتولگی سبزرد هندوانه (Watermelon chlorotic stunt virus, WmCSV) می‌باشد. از این جهت به منظور تعیین دامنه میزبانی و امکان آلودگی مخلوط این سه ویروس در سالهای 1395-1396 از مناطق مختلف استان شامل زابل، زهک، هامون، هیرمند، نیمروز، زاهدان، سراوان، ایرانشهر، نیک‌شهر، سرباز، کنارک و چابهار نمونه‌برداری انجام شد. 90 نمونه متعلق به محصولات مختلف کدوییان شامل خربزه، طالبی، هندوانه، کدو مسمایی و حلوایی جمع آوری شد. به‌منظور تایید آلودگی نمونه‌ها به سه ویروس مذکور، دی ان ای و آر ان ای کل نمونه‌ها به ترتیب با روش Dellaporta و بافر RNX-Plus (شرکت سیناژن) استخراج شد. واکنش زنجیره‌ای پی سی آر (Polymerase Chain Reaction, PCR) با دی ان ای استخراجی با استفاده از آغازگرهای اختصاصی رفت و برگشت Gem-CP-V جهت تکثیر ناحیه ژن رمزکننده پروتئین پوششی (Coat Protein, CP) جنس Begomovirus صورت گرفت. همچنین برای شناسایی گونه‌های CYSDV وCVYV از آر ان ای استخراجی، به ترتیب از آغازگرهای CYSCPf و CYSCPr، تکثیر کننده ژن رمز کننده پروتئین پوششی CYSDV و آغازگرهای CVYVf و CVYVr تکثیر کننده ژن رمز کننده پروتئین پوششی CYSCV جهت آزمون واکنش نسخه‌برداری معکوس زنجیره‌ای پی سی آر (Reverse Transctiption Polymerase Chain Reaction, RT-PCR) استفاده شدند. جهت سنتز cDNA نیز از آغازگر Random Hexamer استفاده شد. نتایج تعیین توالی محصولات مورد انتظار در PCR (600 جفت باز برای WmCSV) و RT-PCR (750 جفت باز برای CYSDV و 480 جفت باز برای CVYV) تأیید کننده آلودگی کدوییان شامل میزبانهای طالبی، خربزه و هندوانه به CYSDV به این سه ویروس تأیید شد بطوریکه40، 53 و 43 درصد از نمونه‌ها به ترتیب به ویروس‌های CYSDV، CVYV WCSV آلوده بودند. آلودگی مخلوط بین نمونه‌های جمع آوری شده با 5 ، 16 و 5 درصد از نمونه‌ها به ترتیب به آلودگی دوتایی ویروس-های (CYSDV+CVYV)، (CVYV+WmCSV) و (WmCSV+CYSDV) مشاهده شد. همچنین 3 درصد از نمونه‌ها شامل گیاهان طالبی و هندوانه به آلودگی همزمان WmCSV+CYSDV+CVYV آلوده بودند. این اولین گزارش از آلودگی گونه‌های CYSDV و CVYV از استان سیستان و بلوچستان می‌باشد.

کلیدواژه ها

گزارش؛ توالی یابی؛ آغازگر؛ واکنش زنجیره ای پلی مراز؛ نسخه برداری معکوس

موضوعات

بیماریهای ویروسی و ویروئیدی

Title

Detection of host rang and mixed infection of Cucurbit yellow stunting disorder virus (CYSDV), Cucurbit vein yellow virus (CVYV) and Watermelon chlorotic stunt virus (WmCSV) in cucurbits of Sistan and Baluchestan Province

Authors

Majid Jafari, Zahra Sadeghi, Saeed Nasrollanejad

Abstract

Surveys of different fields of cucurbits in Sistan and Baluchestan province showed that different symptoms of viral diseases such as yellowing, leaf malformation and stunting were observed in prevalent reports that were liked to Cucurbit yellow stunting disorder virus (CYSDV), Cucurbit vein yellow virus (CVYV) and Watermelon chlorotic stunt virus (WmCSV). Therefore, in order to detect host range and possibility of mixed infections to these three viruses, from different regions of Sistan and Baluchestan province like Zabol, Zahak, Hamoon, Hirmand, Nimroz, Zahedan, Saravan, Khash, Iranshahr, Nikshahr, Sarbaz, Konarak and Chabahar sampling has been taken in 2016-2017. 90 samples were taken from different plants belongs cucurbitaceae family such as different kinds of melons, watermelon, squash. In order to confirm infection, total RNA and DNA were extracted by Dellaporta and RNX-Plus buffer (Sinagene company). Polymerase Chain Reaction (PCR) with exteracted DNA by specific forward and reverse primers detecting Begomoviruses species replicat partial coat protein gene. Also to identify CYSDV and CVYV were used exteracted RNA and replicative specific primers (CYSCPf and CYSCPr for CYSDV, CVYVf and CVYVr for CVYV) from their coat protein genes via revers transcriptaion polymerase chain reaction (RT-PCR). In order to replicate cDNA, were used from random hexamer primer, too. Sequencing results of PCR expected products (600 bp for WmCSV) and RT-PCR (750 bp and 480 bp for CYSDV and CVYV), confirmed infectivity of melons and watermelon to WmCSV, CYSDV and CVYV in Sistan and Baluchestan province 43, 40 and 53 percentage, respectively. The mixed infections were observed from CYSDV+CVYV, CVYV+WmCSV and WmCSV+CYSDV as 5%, 16% and 5%, respectively. Also, 3% of total samples specially melons and watermelon showed mixed infection with three viruses (WmCSV + CYSDV + CVYV), simultaneously. This is the first report of CYSDV and CVYV from Sistan and Baluchestab province.

Keywords

Report, sequencing, Primer, Polymerase chain reaction, Reverse transcription