- |
-
رابطه جمعیت حامل ویروس زنجرک Laodelphax striatellus با وقوع بیماریهای ویروسی موزائیک ایرانی ذرت و کوتولگی زبر ذرت در شرایط مزرعه
نویسندگان
1لرستان- نورآباد- خیابان دادگستری- روبروی اداره گاز
2دانشگاه شیراز
3دانشگاه شیراز- دانشکده کشاورزی- بخش گیاهپزشکی
چکیده
بیماریهای ویروسی موزائیک ایرانی ذرت (Maize Iranian mosaic virus, MIMV) و کوتولگی زبر ذرت (Maize rough dwarf virus, MRDV) از مهمترین و شایع ترین بیماریهای ویروسی ذرت در ایران به ویژه استان فارس و از عوامل اصلی محدودیت کشت ذرت می‌باشند و سالانه از نظر اقتصادی خسارت قابل توجهی به این محصول وارد می-کنند. طی سال‌های زراعی 95-1394 و 96-1395 بررسی‌های مزرعه‌ای به منظور تعیین رابطه جمعیت حامل ویروس زنجرک Laodelphax striatellus با وقوع بیماریهای ویروسی موزائیک ایرانی ذرت و کوتولگی زبر ذرت و همچنین اثر تاریخ کشت و تیمار بذر ذرت علوفه‌ای رقم سینگل کراس 704 (Sc704) بر میزان خسارت و عملکرد ذرت ناشی از دو ویروس مورد نظر انجام گرفت. آزمایش در قالب طرح بلوک‌های کاملاً تصادفی با سه تکرار به صورت کرت‌های خرد شده و در سه تاریخ کشت به فاصله 15 روز از 1 اردیبهشت تا 30 اردیبهشت صورت گرفت. جمع آوری زنجرک ناقل L. striatellus از فروردین ماه 1395 تا مهر ماه 1396 به صورت هفتگی هم در طول فصل رشد ذرت در مزرعه آزمایشی و هم در حاشیه مزارع، علف‌های هرز و گرامینه‌های وحشی با دستگاه دی وک (D-VAC) انجام شد. نمونه برداری از علایم شبه ویروسی، در مرحله پنج برگی این گیاه (20 روز پس از کاشت) برای هر سه تاریخ کشت و در دو سال زراعی متوالی 95 و 96 انجام شد.
بررسی آلودگی گیاهان ذرت طی دو فصل زراعی از زمان شروع مرحله چندبرگی تا ظهور علائم ناشی از MIMV و MRDV در مزرعه با چهار روش الایزا، دات بلات، RT-PCR و Multiplex RT- PCR انجام شد. همچنین تغییرات جمعیتی زنجرک L. striatellus در طول سال و نیز ردیابی دو ویروس مذکور در آنها به چهار روش (DIBA)، RT-PCR، Multiplex RT-PCR و Samplified RT-PCR به صورت هفتگی صورت گرفت. چهار روش انجام شده برای ارزیابی آلودگی زنجرک های L. striatellus نتایجی یکسانی داشت. با استفاده از آموده آر.ان.ای کل استخراج شده از نمونه های برگی مثبت و منفی (شاهد) حاصل از آزمون الایزا، به ترتیب برای MIMV بخشی از ناحیه 3' مربوط به چارچوب باز خوانش گلیکوپروتئین Glycoprotein) G) و برای MRDV بخشی از ناحیه 3' قطعه شماره 10 مربوط چارچوب باز خوانش پوشش پروتئینی ویروس (VP10) توسط آغازگرهای اختصاصی طراحی‌شده تکثیر شدند، در حالی که در آموده آر.ان.ای کل استخراج شده از گیاهان سالم هیچ قطعه ای تکثیر نشد. طول قطعات مورد انتظار برای MIMV و MRDV به ترتیب 220 و 416 جفت باز بودند. علارغم بازده بالای سه روش DIBA، RT-PCR و Multiplex RT-PCR، در این تحقیق از روش ساده ای با نام Samplified RT-PCR استفاده شد. این اولین تلاش برای ردیابی دو ویروس MIMV و MRDV به کمک این روش می باشد که در این تحقیق انجام گردید. .
بررسی آلودگی گیاهان ذرت طی دو فصل زراعی از زمان شروع مرحله چندبرگی تا ظهور علائم ناشی از MIMV و MRDV در مزرعه با چهار روش الایزا، دات بلات، RT-PCR و Multiplex RT- PCR انجام شد. همچنین تغییرات جمعیتی زنجرک L. striatellus در طول سال و نیز ردیابی دو ویروس مذکور در آنها به چهار روش (DIBA)، RT-PCR، Multiplex RT-PCR و Samplified RT-PCR به صورت هفتگی صورت گرفت. چهار روش انجام شده برای ارزیابی آلودگی زنجرک های L. striatellus نتایجی یکسانی داشت. با استفاده از آموده آر.ان.ای کل استخراج شده از نمونه های برگی مثبت و منفی (شاهد) حاصل از آزمون الایزا، به ترتیب برای MIMV بخشی از ناحیه 3' مربوط به چارچوب باز خوانش گلیکوپروتئین Glycoprotein) G) و برای MRDV بخشی از ناحیه 3' قطعه شماره 10 مربوط چارچوب باز خوانش پوشش پروتئینی ویروس (VP10) توسط آغازگرهای اختصاصی طراحی‌شده تکثیر شدند، در حالی که در آموده آر.ان.ای کل استخراج شده از گیاهان سالم هیچ قطعه ای تکثیر نشد. طول قطعات مورد انتظار برای MIMV و MRDV به ترتیب 220 و 416 جفت باز بودند. علارغم بازده بالای سه روش DIBA، RT-PCR و Multiplex RT-PCR، در این تحقیق از روش ساده ای با نام Samplified RT-PCR استفاده شد. این اولین تلاش برای ردیابی دو ویروس MIMV و MRDV به کمک این روش می باشد که در این تحقیق انجام گردید. .
کلیدواژه ها
ویروس موزائیک ایرانی ذرت؛ ویروس کوتولگی زبر ذرت؛ زنجرک؛ تاریخ کشت؛ فارس؛ واکنش پی سی آر ترانویسی معکوس؛ پی سی آر چند هدفی؛ الایزا؛ دات بلات؛ اپیدمی؛ شدت بیماری؛ خسارت
موضوعات
Title
Relationship Between Population of Viruliferous Laodelphax striatellus with Incidence of Diseases Caused by Maize iranian mosaic virus and Maize rough dwarf virus under Field Conditions
Authors
masoud rezaei, keramatolah izadpanah, HABIB HAMZEH ZARGHANI
Abstract
Maize(corn)(Zea mays L.) As a one-year-old plant of the Poaceae grain family, is one of the four major crops in the world which is ranked at the third position after wheat and rice. In Fars province, the area under cultivation is 35000 grain corn and 25000 hectares of forage corn and this province has the first rank in the field of forage corn. Owing to the importance of corn in nourishing human and animal, as well as the presence of Maize Iranian mosaic virus (MIMV) and Maize rough dwarf virus (MRDV) viral diseases which are among the most important and most common viral diseases of corn, these factors are the main elements of limiting the cultivation of corn and huge annual economical loses to this product. Therefore, the epidemiology and study of these viruses and their vectors will be effective in managing these diseases. Maize Iranian mosaic and Maize rough dwarf diseases are mainly transmitted by their main vectors, namely saying small brown plant hoppers: Laodelphax striatellus (Fallén 1806) and Unkanodes tanasijevici (Dlabola, 1965) (Hemiptera : Delphicidae) in a constant and circulative-propagative manner. But in Fars province, the main vector of these viruses is L. striatellus. So based on the researches, this study is set out to examine the relationship between the population of L. striatellus Plant hopper virus and the occurrence of Maize Iranian mosaic virus, Maize rough dwarf virus and single cross variety 704 (Sc704) cultivated in north of Fars province under field conditions during two years of cultivation and three different cultivation times. The process of collecting L. striatellus Planthoppers started from March 2016 to October 2017 on a weekly basis during the growing time of corn in the experimental field as well as on the margins of the fields, weeds and wild graminaes through making use of a (D-VAC) device.
Keywords
maize(corn), Maize Iranian mosaic virus, Maize rough dwarf virus, RNA extraction, Planthopper, Fars, cultivation time, reverse transcription PCR reaction, multiplex RT- PCR, ELISA, dot blot, epidemy