وقوع قارچ Botrytis sinoviticola Zhang, Zhou & Li روی میوه انار
XML
نویسندگان
1خیابان نامجو-خیابان سلمان فارسی-کوچه حاج آقا زاده-پلاک ۱۸-طبقه ۲
2گروه گیاهپشکی ، دانشکده کشاورزی و منابع طبیعی دانشگاه تهران
3کرج- چهار راه مصباح – بلوار امامزاده حسن – ساختمان بنیان – پلاک 796 – طبقه چهارم – واحد 16- کد پستی 3134758635
4خیابان جردن- خیابان وحید دستگردی- پلاک 265- ط هشتم - واحد 6
چکیده
قارچ Botrytis cinerea عامل بیماری کپک خاکستری می باشد که می تواند بیش از 220 گونه ی گیاهی را آلوده کند. این قارچ به عنوان یکی از مهم ترین بیمارگرهای پس از برداشت در جهان محسوب می شود. این گونه دارای تعدای گونه ی پنهان می باشد که از لحاظ ریخت شناختی شبیه به B. cinerea هستند و به صورت هم بوم با آن روی میزبان گیاهی قرار دارند. در این پژوهش، نمونه ‌های میوه انار دارای علایم کپک خاکستری برای بررسی حضور گونه های پنهان B. cinerea از سرد خانه های کشور جمع آوری شدند. بعد از جداسازی و خالص سازی , تک کنیدیوم ها از جدایه ها روی محیط غذایی PDA در تشتک پتری قرار داده شدند و به مدت دو هفته در دمای 25 درجه سلسیوس در شرایط تاریکی نگه داری شدند. در مجموع ده جدایه از جنس Botrytis استحصال گردید. استخراج DNA ژنومی انجام گرفت. برای شناسایی گونه های پنهان، یک قطعه با طول تقریبی 1171 جفت باز از ژن Bc-hch که همولوگ ژن Nc-het-c (مربوط به ناسازگاری رویشی در Neurospora Crassa ) می باشد، توسط آغازگرهای اختصاصی تکثیر گردید. با استفاده از آنزیم برشی Hhal برای برش دادن محصول PCR، شش قطعه با دو الگوی باندی در میان جدایه ها ایجاد گردید. بر روی ژل آگارز 1.2 درصد، در میان همه ی جدایه ها الگوی پنج باند یکسان بود ولی طول بزرگترین قطعه در یک جدایه 601 جفت باز بود (مشابه الگوی باندی گونه های پنهان B. cinerea ) در حالی که در دیگر جدایه ها ,طول بزرگترین قطعه 517 جفت باز بود (مشابه الگوی باندی B. cinerea ). برای شناسایی این جدایه، بخشی از توالی سه ژن ( RPB2 ,G3PDH و HSP60 ) تکثیر و توالی یابی گردید. آنالیز هم ردیفی توالی ها نشان دهنده ی شباهت 99% این جدایه به Botrytis sinoviticola می باشد. در محیط کشت سیب زمینی- دکستروز- آگار در دمای 25 درجه سلسیوس طی دو هفته در شرایط تاریکی، B. sinoviticola تشکیل پرگنه ای به رنگ سفید همراه اسکلروت های زیادی داد اما در B. cinerea پرگنه ای خاکستری رنگ به همراه تعداد کمی اسکلروت تشکیل گردید. به علاوه، پرگنه ی B. cinerea رشد سریع تری را نسبت به B. sinoviticola نشان داد و هیچ ویژگی ریخت شناختی متمایز کننده ی دیگری بین این دو گونه مشاهده نگردید. این اولین گزارش از قارچ B. sinoviticola روی انار در جهان و اولین گزارش از این گونه برای میکوبیوتای ایران می باشد.
کلیدواژه ها
موضوعات
 
Title
Occurrence of Botrytis sinoviticola Zhang, Zhou & Li on pomegranate fruit
Authors
Amin Sadeghi, Mohammad Javan nikkhah, Omid Atghia, Azad Omrani
Abstract
Botrytis cinerea is the causal agent of gray mold disease on more than 220 plant species. B. cinerea is considered as one of the most important pathogens responsible for post harvest decay in the world. B. cinerea has a number of cryptic species that are morphologically similar with B. cinerea and live in sympatry with B. cinerea on plant hosts. In the present study, pomegranate fruit samples with gray mold symptoms were collected from cold storages in Iran to investigate the presence of B. cinerea cryptic species. After isolation and purification, single conidia from isolates plated on PDA in petri dishes and incubated at 25 ℃ under dark condition for two weeks. A total of 10 isolates from Botrytis genus were achieved. Genomic DNA was extracted. In order to identify cryptic species, an 1171 bp fragment of Bc-hch gene, a homolog of Nc-het-c (Related to vegetative incompatibility locus of Neurospora. crassa) gene was amplified with specific primers. By using Hhal restriction enzyme for enzymatic digestion of PCR product, six fragments were generated that showed two banding patterns among isolates. The pattern of five bands was the same among all isolates but the length of the largest fragment was 601 bp in one isolate (similar to the banding pattern of cryptic species) while in other isolates, the length of the largest fragment was 517 bp (similar to the banding pattern of B. cinerea) . To identify this species, three genes (HSP60, RPB2 and G3PDH) were partially amplified and sequenced. Blast analysis of three sequences showed 99% similarity with Botrytis sinoviticola. On PDA at 25 ℃ under dark condition for two weeks, B. sinoviticola formed whitish colony with abundant sclerotia but B. cinerea formed gray colony with a few sclerotia. Moreover, B. cinerea colony grew faster than the B. sinoviticola colony and no other distinctive morphological characteristics was found between these two species. This is the first report of B. sinoviticola on pomegranate fruit in the world and first report of presence of the fungus for mycobiota of iran.
Keywords
Gray mold, Cryptic species, Restriction enzyme, Sympatry, Botrytis cinerea