مطالعه مولکولی و ریخت شناختی گونه Aporcelinus mediterraneus
XML
نویسندگان
1استان اذربایجان شرقی. تبریز. بلوار 29 بهمن دانشگاه تبریز دانشکده کشاورزی گروه گیاهپزشکی
2گروه گیاهپزشکی. دانشکده کشاورزی. دانشگاه تبریز
3دانشگاه تبریز، بلوار 29 بهمن، تبریز
4اردبیل خ فلسطین شرقی 10 قطعه 3489
چکیده
جنس‌ Aporcelinus متعلق به خانواده Aporcelaimidae بوده و به واسطه داشتن بدنی قوی با خمیدگی به سمت شکمی و به اندازه 9/0 تا 2/2 میلی‌متر، کوتیکول دو لایه‌ با ضخامت متفاوت، ناحیه لبی دارای فرورفتگی نسبت به بدن، لب‌ها گرد و کم و بیش مجزا، آمفید قیفی‌شکل با دهانه عریض، ادونتواستایل کمی بلندتر از عرض ناحیه لبی و دارای دهانه‌ای به اندازه نصف طول ادونتواستایل، دریچه بین مری و روده مخروطی با یک زائده غده ‌مانند پشتی در محل اتصال مری به روده، ماده‌ها دارای دو لوله جنسی متقابل، شکاف تناسلی عرضی با لبه‌‌های اسکلروتیزه، پیش ‌راست -روده کوتاه، دم مخروطی محدب با تحدب پشتی یا در ابتدا مخروطی محدب و سپس مقعر، مشابه در هر دو جنس نر و ماده، به اندازه یک تا دو برابر و نیم عرض ناحیه مخرج مشخص می‌گردد. برای بررسی وضعیت جنس‌های این خانواده، تعدادی نمونه خاک در سال‌های 95 و 96 از فراریشه پوشش گیاهی استان‌ آذربایجان‌شرقی جمع‌آوری و نماتدها با استفاده از روش‌ سینی وایت ‌هد و همینگ استخراج و با روش دگریسه تثبیت و به گلیسیرین خالص انتقال داده شدند، پس از تهیه اسلاید‌های میکروسکوپی دائم، شناسایی نمونه‌ها بر اساس مشخصات ریخت‌شناختی و داده‌های ریخت‌سنجی، با استفاده از میکروسکوب نوری و کلیدهای شناسایی معتبر صورت گرفت. در مطالعه مولکولی، ناحیه ژنومی28S D3/ D2 از rRNA با پرایمرهای مربوطه تکثیر و مورد توالی‌یابی قرار گرفت. ترسیم درخت‌واره تبارزایی با استفاده از روش Maximum likelihood انجام شد. جمعیت مورد مطالعه از نظر صفات ریخت‌شناختی، ریخت‌سنجی و نتایج مولکولی به عنوان Aporcelinus mediterraneus شناسایی شد. مقایسه توالی ناحیه ژنومی 28S D3/ D2ازrRNA آن با توالی‌های در دسترس از گونه فوق مشابهت نشان داد. این گونه بیشترین شباهت را با A. diadematus دارد، ولی در داشتن بدنی استوانه‌ای شکل با خمیدگی کمتر، تمایز یافتگی کمتر لب‌ها و پیش‌راست‌روده بلندتر، طول بدن بلندتر(0/2-70/1 در مقابل 65/1-40/1 میلی‌متر)، عرض لب بیشتر (6/20-7/18 در مقابل 18-16 میکرومتر)، ادونتواستایل بلندتر (7/23-8/21 در مقابل 21-20 میکرومتر) و طول دم بیشتر (4/71 -3/59 در مقابل 55-45 میلی‌متر) با آن متفاوت است. هم‌چنین این گونه از لحاظ صفات ریخت‌شناختی و ریخت‌سنجی به گونه Allodorylaimus andrassy نزدیک می باشد ولی در طول بدن (2-7/1 در برابر2/2 میلی‌متر)، مقادیر a(27 تا 23 در برابر 33 تا 29)، b(3/4- 3/3 در برابر 6-3/5 )، c(32-25 در برابر41-37 ) و V (57-50 در برابر47 ) از آن قابل تشخیص است. با توجه به قرار گرفتن گونه A. andrassy به همراه A. mediterraneus در یک کلاد، احتمال این که گونه اول نیز متعلق به جنس Aporcelinus باشد، زیاد است و تشخیص آن به تجدید نظر نیاز دارد.
کلیدواژه ها
موضوعات
 
Title
Morphological and molecular identification of Aporcelinus mediterraneus
Authors
kioumars mireki, arezoo naghavi, Gholamreza Niknam, amin fallahi
Abstract
The genus Aporcelinus belonging to the Aporcelaimidae family, is characterized by its ventrally curved strong body with 0.9 to 2.2 mm long, two-layered cuticle of the different thickness, lip region offset by constriction, Lips rounded and more or less distinct, amphideal fovea cup-shaped with broad opening , odontostyle somewhat longer than lip region width with an aperture occupying half of its length, cardia conical with a dorsal gland-like structure present at pharyngo-intestinal junction, genital system of female didelphic-amphidelphic, vulva transverse with sclerotized lips, short pre-rectum, tail conical with convex dorsal contour or at first a convex-conoid and then concave, 1-2.5 times the anal body diameter long, similar in both sexes. In order to study the genera of this family, a number of soil samples were collected from rhizosphere of various plants in East- Azarbaijan province during 2016-2017. Nematodes were extracted using the modified whitehead tray method, fixed by De Grisse method and transferred to anhydrous glycerin. After the preparation of permanent slides, identification of the nematodes was performed based on morphological and morphological characteristics using light microscopy and valid keys. In the molecular study, the genomic region of D2-D3 segment of 28S rRNA, was amplified using specific primers and sent for sequencing. The maximum likelihood phylogenetic methods was used for reconstructing of the phylogenetic tree. The understudy population was identified as Aporcelinus mediterraneus based on morphometric, morphological and molecular data. The comparison of its sequences related to the D2-D3 segment of 28S rRNA gene showed homology with available sequences of this species. This species is most similar to A. diadematus, but is differentiated from this species by having a cylindrical body with less curvature, less distinctive lips and a longer peri-rectum, longer body length (1.70-2 vs 1.40-1.65 mm), lip region (18.7- 20.6 vs. 16-18 μm), larger odontostyle (21.8-23.7 vs 20-21 μm) and longer tail length (59.3 -71.4 vs. 45-55 μm). This species is similar to Allodorylaimus andrassy based on morphometric and morphological characteristics but is distinguished from this species regarding the following indices: L (1.7-2 vs 2.2 mm), lower a (23-27 vs 29-33), lower b (3.3-4.3 vs 5.3-6), lower c (25-32 vs 37-41) and greater V (50-57 vs 47) values. Taking into account the position of A. andrassy and A. mediterraneus in a common clade, it can be with high probability that the first species also belongs to the genus Aporcelinus and its diagnosis requires reconsideration.
Keywords
Molecular identification, morphology, Aporcelaimidae, D2-D3 28S rRNA