گونه هایPhaeoacremonium و Coniolariella gamsii همراه با سرخشکیدگی و شانکر درختان انجیر (Ficus spp.) در ایران
کد مقاله : 1374-23IPPC
نویسندگان
1شهداد خیابان طالقانی بلوار شهدای گمنام
2کرمان، بلوار 22 بهمن، میدان پژوهش، دانشگاه شهید باهنر، دانشکده کشاورزی، بخش گیاهپزشکی
چکیده
جنس Phaeoacremonium (Togniniaceae، Togniniales) در حال حاضر شامل 60 گونه می باشد. گونه های این جنس به عنوان درون زی و بیمارگر آوندی بر روی گیاهان مختلف چوبی دیده می شوند. در این مطالعه وجود بیمارگرهای قارچی شاخه و تنه همراه با زوال درختان انجیر (Ficus spp.) در باغ های مختلف دو استان کرمان و فارس مورد بررسی قرار گرفت. نمونه برداری در سال های 1395 و 1396 از شاخه و تنه درختان بیمار که دارای نشانه های بیماری به شکل سرخشکیدگی و شانکر بودند انجام شد. همه نمونه های جمع آوری شده جهت جداسازی و شناسایی قارچ های همراه به آزمایشگاه منتقل شدند. هر نمونه در ابتدا به صورت عرضی برش داده شد و نوع نکروز بافت چوب در آن مشاهده و ثبت گردید. تکه های کوچک (در حدود 4×4 میلی متر) از ناحیه بین بافت سالم و آلوده چوب جدا و ابتدا به مدت دو دقیقه در محلول هیپوکلریت سدیم نیم درصد گندزدایی و سپس دو مرتبه نیز در آب استریل شستشو داده شدند. بعد از عمل ضدعفونی، قطعات چوب بر روی دستمال کاغذی استریل خشک و سپس بر روی محیط کشت عصاره سیب زمینی-دکستروز-آگار (PDA) قرار داده شدند. تشتک های پتری حاوی قطعات کشت داده شده به مدت 10 تا 15 روز در دمای 25 درجه سانتیگراد نگهداری شدند. همه جدایه ها برای بدست آوردن کشت خالص تک اسپور شدند. شناسایی اولیه جدایه ها بر اساس ویژگی های دیداری مانند رنگ و بافت پرگنه ها و همچنین ساختارهای میکروسکوپی صورت گرفت. شناسایی جدایه های منتخبی که بر اساس ویژگی های ظاهری مورد بررسی قرار گرفته بودند به روش مولکولی مورد تایید قرار گرفت. برای این کار کل DNA از کشت های 15 تا 20 روزه جدایه های انتخاب شده به روش CTAB ( cetyl trimethylammonium bromide) استخراج گردید. ناحیه ITS ( ITS1-5.8S ITS2) و بخشی از ژن بتا توبولین (BT) در این جدایه ها به ترتیب با جفت آغازگرهای ITS1/ITS4 و T1/Bt2b تکثیر شد. بر اساس داده های ریخت شناختی و مولکولی 37 جدایه شامل Phaeoacremonium parasiticum (30 جدایه)، Pm. sicilianum (پنج جدایه) و Coniolariella gamsii (دو جدایه) از دو گونه انجیر یعنی انجیر خوراکی یا Ficus carica و انجیر گرده افشان یا Ficus pesudocarica جداسازی و شناسایی شدند. این مطالعه اولین گزارش از Pm. parasiticum و Pm. sicilianum بر روی F. pesudocarica و C. gamsii بر روی F. carica در دنیا می باشد. مطالعه حاضر همچنین اولین گزارش از Pm. parasiticum بر روی F. carica در ایران محسوب می گردد.
کلیدواژه ها
موضوعات
Title
Phaeoacremonium species and Coniolariella gamsii associated with dieback and canker of fig trees (Ficus spp.) in Iran
Authors
somayeh kadkhodahemmatabadi, Hamid Mohammadi
Abstract
The genus Phaeoacremonium (Togniniaceae, Togniniales) presently contains 60 species. Species of this genus are found in various woody plants as endophytes or as vascular plant pathogen. The occurrence of fungal trunk pathogens associated with the decline of fig trees (Ficus spp.) were determined in several surveys conducted in fig orchards in Kerman and Fars provinces. Samples were collected between 2016 and 2017 from trunk and branches of trees showing dieback and canker symptoms. All samples were taken to the laboratory to perform fungal isolations and identification. Each sample was first cut in cross section and different internal wood lesion types were recorded. Wood pieces (approximately 4×4 mm) were cut from the margins between necrotic and healthy tissue and surface-sterilised by soaking in 0.5% NaOCl solution for 2 min and then rinsed twice with sterile distilled water. Following sterilisation, wood segments were dried on sterile paper and then placed on potato-dextrose agar (PDA) plates. Plates were incubated at 25°C for 10-15 days. Single spore cultures were made from all isolates to obtain pure colonies. The initial identification of isolates was made based on visual characteristics such as colony color, colony texture and microscopic structures. Representative isolates that were identified using morphological technique were confirmed by molecular method. Total genomic DNA from selected isolates was extracted from 15 to 20 day-old cultures using the CTAB (cetyl trimethylammonium bromide) method. The internal transcribed spacer (ITS) region of the ribosomal RNA operon (ITS1-5.8S ITS2), and part of the β-tubulin (BT) were amplified using the ITS1/ITS4 and T1/Bt2b primers, respectively. According to morphological and molecular data, 37 fungal isolates include of Phaeoacremonium parasiticum (30 isolates), Pm. sicilianum (five isolates) and Coniolariella gamsii (two isolates) were recovered from two species of Ficus as Ficus carica and Ficus pesudocarica. This is the first report of Pm. parasiticum and Pm. sicilianum on F. pesudocarica and Coniolarella gamsii on F. caricain the world. The present study is also the first report of Pm. parasiticum from F. carica in Iran.
Keywords
Branch and trunk diseases, Fars, Kerman, Beta tubulin, ITS