شناسایی باکتری‌های مولد لکه قهوه‌ای قارچ خوراکی در شهرستان شهرکرد

کد مقاله : 1526-23IPPC
نویسندگان
1گروه گیاهپزشکی دانشگاه شهرکرد
2شهرکرد- بلوار رهبر- دانشگاه شهرکرد
چکیده
بیماری لکه قهوه‌ای قارچ خوراکی تکمه‌ای سفید (Agaricus bisporus) از بیماری‌های مهم و مشکل‌زا در سالن‌های پرورش قارچ است. علایم بیماری به صورت لکه‌های نامنظم زرد، قهوه‌ای تا سیاه روی کلاهک و ساقه قارچ مشاهده می‌شود. باکتری Pseudomonas tolaasii به عنوان عامل اصلی ایجاد لکه قهوه‌ای مطرح می‌باشد، اما در منابع غالبا بیش از یک میکروارگانیسم به عنوان عامل لکه قهوه‌ای گزارش می شود. جهت بررسی وضعیت آلودگی مراکز پرورش قارچ و نیز شناسایی عامل بیماری در شهرستان شهرکرد، طی تابستان تا زمستان سال 1396، مراکز پرورش قارچ در شهرهای مختلف شهرستان شهرکرد شامل شهرکرد، چوبین، وردنجان و... بازدید شد و از قارچ‌های دارای علایم پوسیدگی و قهوه‌ای شدن یا تغییر رنگ بافت نمونه برداری شد. جداسازی روی محیط کشت آگار مغذی انجام شد. پس از خالص‌سازی کلونی‌های ظاهر شده روی محیط کشت، آزمون اثبات بیماریزایی جدایه‌ها روی بلوک‌های تهیه شده از کلاهک و ساقه قارچ و نیز روی کلاهک سالم قارچ انجام شد. جهت شناسایی جدایه‌های بیماریزا آزمون‌های مختلف فنوتیپی و بیوشیمیایی شامل گرم، رشد در شرایط هوازی و بی‌هوازی، اکسیداز، کاتالاز، آرژنین دهیدرولاز، تولید لوان، قدرت لهاندن سیب‌زمینی، واکنش فوق حساسیت روی شمعدانی، هیدرولیزژلاتین و نشاسته و مصرف منابع کربنی انجام شد. در آزمون بیماریزایی، جدایه‌ها درجات مختلفی از تغییر رنگ و پوسیدگی را نشان دادند. بر اساس نتایج خصوصیات فنوتیپی از جمله واکنش منفی در آزمون گرم، رشد در شرایط هوازی، تولید رنگدانه فلورسنت روی محیط King’s B، واکنش مثبت در آزمونهای اکسیداز و آرژنین دی هیدرولاز، حساسیت به جنتامایسین و تحمل نمک 4 درصد، اکثر جدایه‌ها به عنوان
tolaasii Pseudomonas شناسایی شدند. این جدایه ها در واکنش زنجیره ای پلیمراز نیز با آغازگرهای اختصاصی Pt-1A/1D ردیابی شدند و شناسایی انها مورد تایید قرار گرفت. نکته قابل توجه تنوع جدایه‌هایP. tolaasii از نظر شدت بیماری زایی و بعضی خصوصیات فنوتیپی بود. در آزمون بیماری زایی، بعضی از سویه‌ها تغییر رنگ شدیدتر و سریع تری روی بلوک و کلاهک قارچ نشان دادند. این سویه‌ها از نظر بعضی خصوصیات فنوتیپی از جمله رنگ کلونی، ایجاد واکنش فوق حساسیت در شمعدانی و توانایی له کردن ورقه های سیب زمینی از سایر سویه‌ها متفاوت بودند. لازم به ذکر است، تعدادی از جدایه‌های بیماریزا بر اساس خصوصیات فنوتیپی و بیوشیمیایی به عنوان جنس Pantoea شناسایی شدند. آزمون‌های بعدی برای شناسایی نوع گونه Pantoea در دست انجام است. بر طبق اطلاعات نگارندگان، این اولین بررسی درمورد شناسایی باکتری‌های مولد لکه قهوه ای قارچ خوراکی در شهرستان شهرکرد می‌باشد.
کلیدواژه ها
موضوعات
 
Title
Identification of bacterial agents, causing brown blotch on cultivated mushrooms in Shahrekord County
Authors
rohollah Mohammadi Eshkaftaki, fatemeh Yousefikopaei, Seyedeh fatemeh Nourbakhsh Shourabi
Abstract
Brown blotch disease of white button mushrooms (Agaricus bisporus) is one of the most important and devastating diseases in mushroom cultivation centers. Symptoms of the disease appear as irregular, yellow or brown to black spots on the cap and stem of mushroom. Pseudomonas tolaasii has been cited as the main causal agent of bacterial blotch, but in scientific resources, usually more than one microorganism is reported as the causal agent of brown blotch. In order to investigate the incidence of this disease and also, to identify its causal agent in Shahrekord County, during summer and winter of 2017, mushroom cultivation centers in different cities of Shahrekord County including Shahrekord, Choobin, Vardanjan and…. were visited. Mushrooms with decayed and brown tissues were collected. Bacterial isolation was performed on nutrient agar medium. All kinds of colonies appeared on the plate were purified. The pathogenicity test of the isolates was performed on the blocks prepared from the cap and stem of mushroom and also on intact cap. For identification of isolates, different phenotypic and biochemical tests including gram reaction, growth under aerobic/ anaerobic conditions, oxidase, catalase, arginine dihydrolyase, levan production, potato soft rot, hypersensitive reaction on geranium and utilization of carbon sources were performed. In pathogenicity test, the isolates showed different degrees of browning or blackening and tissue decaying. According the results of phenotypic and biochemical test for example, negative reaction on gram staining, aerobic growth, producing fluorescent pigment on King’s B medium, positive reaction on oxidase and arginine dihydrolyase tests, sensitivity to gentamycin (10 μg/disk) and 4% NaCl tolerance, most of isolates were identified as P. tolaasii. These isolates were also detected in polymerase chain reaction with specific primers pt-1A/1D, so their identification as P. tolaasii was confirmed. The noticeable point was the diversity of isolates that were identified as P. tolaasii based on some phenotypic characters and diseases severity. In pathogenicity tests, some of these isolates showed higher pathogenicity and leaded to faster and further tissue color change on mushroom blocks and also on intact cap. These isolates were also different from others in some phenotypic characters including color and morphology of colony, HR on geranium and potato rot test. It should be mentioned that some of pathogenic isolates were identified as Pantoea sp. based on phenotypic and biochemical characters. Subsequent tests are in progress to identify the species of Pantoea. Based on author’s knowledge, this is the first study for identification of causal agent of mushroom bacterial blotch in Shahrekord County.
Keywords
Pseudomonas tolaasii, fluorescent pigment, bacterial blotch