استفاده از ژن میتوکندری CO1 در شناسایی گونه‌ی کفشدوزک آسیایی، Harmonia axyridis (Pallas) (Col.: Coccinellidae), : نخستین بار در ایران

کد مقاله : 1411-23IPPC
نویسندگان
1گروه گیاه پزشکی، دانشکده‌ی علوم کشاورزی
2گروه گیاه پزشکی، دانشکده‌ی علوم کشاورزی، دانشگاه گیلان، رشت
3گروه حشره شناسی، دانشکده علوم کشاورزی، واحد شیراز، دانشگاه آزاد اسلامی، شیراز، ایران
4. گروه تنوع زیستی، پژوهشکده علوم محیطی، دانشگاه تحصیلات تکمیلی صنعتی و فناوری پیشرفته کرمان
5. دانشکده علوم زیستی، دانشگاه بوهمای جنوبی، جمهوری چک
چکیده
کفشدوزک آسیایی،(Col.: Coccinellidae) Harmonia axyridis (Pallas) یکی از مهاجم‌ترین حشرات در سراسر جهان است که در چند قاره برای کنترل بیولوژیک کلاسیک شته‌ها معرفی شده است. بنابراین، اهمیت بالای بارکـد DNA در حشره-شناسـی بـه علت تنـوع شدید حشرات و زیان اقتصادی و اهمیت اپیدمیولوژیک و زیستی لارو آنها می‌باشد. مطالعه حاضر اولین گزارش این گونه در ایران است. نمونه‌برداری مورف‌های مختلف H. axyridis در سال 1395 از درختان میوه و باغ‌های زینتی رشت در شمال ایران جمع‌آوری شد. تمام پانزده مورف و مراحل مختلف تخم، لارو، شفیره و افراد بالغ H. axyridis روی درختان فندق، (Corylus avellana L.)؛ آلبالوی وحشی، (Prunus cerasifera Ehrh.)؛ اقاقیا،(Robinia pseudoacacia L.) ؛ درختچه توری(Lagerstroemia indica (L.) Pers.) و خر زهره (Nerium oleander L.) جمع‌آوری شد. به منظورشناسایی دقیـق جنس و گونه‌های کفشدوزک آسیایی جمع‌آوری شده، از روش تکثیر و توالی‌یابی ژن سیتوکروم اکسیداز c COI)) استفاده شد. برای استخراج DNA نمونه‌ها از کیت DNPTM شرکت سیناژن (#DN8115C) استفاده شد. توالی به دست آمده از محصول bp 560 از قبیل CTAAGGAATG AGAGTGTGCT CCATGTACTA CCCATGACCA CGATTAAATA ACATAAGATT TTAGACTTTT ACCCCCTGCT TTAACTCTTT TAATTTTAAG AACAATCGTA GAAATAGGGG CAGGAACAGG ATGAACTGTT TACCCTCCTC TTTCTTCTAA TTTAACACAT AATGGGCCTT CAGTAGATTT AGTGATTTTT AGTTTACATT TAGCAGGAAT TTCCTCAATT TTAGGTGCAG TAAATTTCAT TTCAACTATT ATAAATATAC GTCCATTTGG TATAATACTT GATAAAACTC CTTTATTTGT ATGATCTGTT CTTATTACAG CAATTCTTTT ATTACTATCA CTACCAGTTC TTGCAGGAGC AATTACTATA CTATTAACTG ACCGAAACTT AAATTCTTCT TTTTTTGACC CAACCGGTGG GGGAGACCCA ATTTTATACC AACATTTATT TTGATTTTTT GGCCATCCTG AAGTTTATAT TTTATTTTTA CCGGGA بود. بلاست توالی‌های کفشدوزک آسیایی ما از ناحیه تکثیر شده با CO1شباهت خیلی زیادی (99 درصد) با جمعیت بومی و غیربومی گزارش شده در بانک ژن (NCBI) در سراسر جهان داشت (چین، ایالت متحده امریکا، کانادا، آلمان و لیتوانی). بنابراین، پانزده مورف متفاوت(succinea, spectabilis) از کفشدوزک آسیایی، H. axyridis که شبیه به سایر جمعیت‌های سراسر جهان می‌باشد.
کلیدواژه ها
موضوعات
 
Title
Utility of mitochondrial CO1 gene in species genetic analysis of the Asian ladybird beetle, Harmonia axyridis (Pallas) (Col.: Coccinellidae): First record in Iran
Authors
Mozhgan Mardani-Talaee, Arash Zibaee, Vahid Rahimi, Mehdi Zare Khormizi, Seyed Mozafar Mansouri, Oldřich Nedvěd
Abstract
The Asian ladybird beetle, Harmonia axyridis (Pallas) (Col.: Coccinellidae), is one of the most invasive insects worldwide which has been introduced into several continents for the classical biological control. Thus, analysis of mitochondrial DNA provides important information about the genetic diversity of spreading populations. The current study is the first report of this species in Iran. Sampling different morphs of H. axyridis were collected from fruit and ornamental trees in Rasht, Guilan Province, north Iran during 2016– 2017. All fifteen morphs and different stages of eggs, larvae, pupae and adults of H. axyridis specimens were collected on common hazel (Corylus avellana L.), wild plum (Prunus cerasifera Ehrh.), black locust (Robinia pseudoacacia L.) trees, crepe myrtle (Lagerstroemia indica (L.) Pers.) and oleander (Nerium oleander L.). For genus and species identification of Asian ladybird beetle was used proliferation and cytochrome c oxidase (COI) gene sequencing method. DNA was extracted from whole specimens using the DNPTM Kit (#DN8115C) CinnaGen. Sequencing of the obtained 560 bp product, such as CTAAGGAATG AGAGTGTGCT CCATGTACTA CCCATGACCA CGATTAAATA ACATAAGATT TTAGACTTTT ACCCCCTGCT TTAACTCTTT TAATTTTAAG AACAATCGTA GAAATAGGGG CAGGAACAGG ATGAACTGTT TACCCTCCTC TTTCTTCTAA TTTAACACAT AATGGGCCTT CAGTAGATTT AGTGATTTTT AGTTTACATT TAGCAGGAAT TTCCTCAATT TTAGGTGCAG TAAATTTCAT TTCAACTATT ATAAATATAC GTCCATTTGG TATAATACTT GATAAAACTC CTTTATTTGT ATGATCTGTT CTTATTACAG CAATTCTTTT ATTACTATCA CTACCAGTTC TTGCAGGAGC AATTACTATA CTATTAACTG ACCGAAACTT AAATTCTTCT TTTTTTGACC CAACCGGTGG GGGAGACCCA ATTTTATACC AACATTTATT TTGATTTTTT GGCCATCCTG AAGTTTATAT TTTATTTTTA CCGGGA. Blast search of COI sequences of our specimens revealed high similarity (99%) of the amplified region with COI reported in GenBank (NCBI) from native and invasive populations of H. axyridis in all over the world (China, USA, Canada, Germany, Lithuania). Thus, fifteen slightly different aberrations of two major colour morphs (succinea, spectabilis) were similar as in other invasive populations of H. axyridis.
Keywords
Polymorphism, invasive species, COI gene