اولین گزارش از گونه‌های Allophoma zantedeschiae و Didymella pomorum روی میوه گوجه‌فرنگی در ایران
کد مقاله : 1638-23IPPC
نویسندگان
1تهران- بلوار فردوس غرب- خ شقایق جنوبی- نبش 18 شرقی- پلاک 18 واحد 10
2دانشگاه تهران
3کرج - خیابان دانشکده، پردیس کشاورزی و منابع طبیعی دانشگاه تهران، گروه گیاهپزشکی، کدپستی: 3158777871
چکیده
عوامل بیماریزای قارچی متعددی سبب ایجاد خسارت در گوجه‌فرنگی هنگام کاشت و پس از برداشت می‌گردند. در نمونه‌برداری انجام شده طی سال‌های 95 و 96 از مزارع گوجه فرنگی در شهرستان بابلسر استان مازندران و میوه‌فروشی‌های سطح شهر تهران، میوه‌های گوجه فرنگی دارای علائم پوسیدگی جمع آوری شدند. پس از بررسی سطح میوه‌های آلوده، اندام پیکنیدیوم بر روی سطوح آلوده مشاهده گردید. جهت جداسازی قارچ، ضدعفونی سطحی بخش‌های آلوده با استفاده از پنبه آغشته به الکل 90% انجام گردید و نمونه ها به تشتک پتری حاوی کاغذ صافی مرطوب و استریل انتقال داده شدند. خالص سازی به روش تک‌کنیدی در محیط کشت آب- آگار انجام گردید. جهت شناسایی گونه‌های قارچی براساس ویژگی‌های ریخت‌شناسی طبق توصیف شناسایی بوئرما و همکاران(Boerema et al., 2004) عمل شد. بر این اساس از محیط‌های کشت عصاره مالت آگار(MEA) و آرد یولاف- آگار (OMA) جهت شناسایی استفاده گردید. شناسایی مولکولی جدایه ها نیز با استفاده از تکثیر نواحی ژنومیITS (آغازگر‌هایITS1 و ITS4) ناحیه ژنی اکتین (آغازگر‌های ACT-512F و ACT-783R) و ناحیه ژنی بتا توبولین (آغازگر‌های TUB2Fd و TUB4Rd) انجام شد. در نتیجه، دو گونه Allophoma zantedeschiae و Didymella pomorum شناسایی شدند. طبق تقسیم‌بندی بوئرما و همکاران این دو گونه در جنس Phoma و بخش Peyronellaea قرار می گرفتند. قطر پرگنه قارچ در محیط‌های کشت OMA و MEA پس از هفت روز در شرایط 13 ساعت روشنایی و 11 ساعت تاریکی و دمای 22 درجه سلسیوس 5 و 5/4 سانتی متر به ترتیب برای گونه A. zantedeschiae و قطر پرگنه 5/7 و 5/3 سانتی‌متر در مورد گونه D. pomorum بدست آمد. گونه A. zantedeschiae دارای پیکنیدیوم کروی تا کشیده و بیضوی به صورت منفرد به قطر 120 تا 250 میکرومتر، کنیدیوم‌ها بی‌رنگ تا قهوه‌ای بسیار روشن، تخم‌مرغی تا بیضوی، فاقد قطره چربی به ابعاد (1/3-)4-2 × (3/6-)9-5 میکرومتر و کلامیدوسپور‌های متنوع چند سلولی می-باشند. مقایسه توالی نواحی ITS-rDNA، اکتین و بتاتوبولین این جدایه‌ها با توالی‌های موجود در بانک‌ژن در مورد هر سه ناحیه ژنی 99% شباهت را با سایر جدایه‌های گونه A. zantedeschiae نشان داد. گونه D. pomorum دارای پیکنیدیوم تقریباً کروی واجد روزنه مشخص به قطر 75 تا 125 میکرومتر، کنیدیوم‌ها بی‌رنگ، تک‌سلولی، تخم‌مرغی تا بیضوی، به ابعاد (9/1-)5/2-5/1 × (6/5-)7-5 میکرومتر دارای قطره چربی، تولید کلامیدوسپور‌ها به صورت تک‌سلولی و چند سلولی توسط ریسه‌ها می‌باشند. مقایسه توالی نواحی ITS-rDNA، اکتین و بتاتوبولین این جدایه‌ها با توالی‌های موجود در بانک‌ژن به‌ترتیب 98%، 100% و 99% شباهت را با سایر جدایه‌های گونه D. pomorum نشان داد.
کلیدواژه ها
موضوعات
Title
First report of Allophoma zantedeschiae and Didymella pomorum on tomato fruit in Iran
Authors
Elham Amirdehi, Khalil Berdi Fotouhifar, Mohammad Javan-Nikkhah
Abstract
Fungal pathogens causes pre and post harvest diseases in Solanum lycopersicum. Tomato fruits with rot symptoms were collected from Babolsar fields, Mazandaran province and Tehran fruit markets,Tehran province in 2016 and 2017. Pycnidium was observed on the surface of infected fruits. The fruits were surface-sterilized with 90% etanol and infected samples were placed to humid and steril petri dish. Pure fungal culture was obtained by single spore in water agar culture medium. Fungal species identification was performed based on morphological features according to Boerema et al.(2004). Molecular identification was carried out using ITS, actin and β-tubulin nucleotide sequences. Eventually, Allophoma zantedeschiae and Didymella pomorum were identified. According to Boerema et al.(2004), these two species were classified in Phoma section peyronellaea. Colonies dimeter in OMA and MEA culture medium was measured 5 cm and 4/5 cm for A. zantedeschiae and for D. pomorum 7/5 cm and 3/5 cm after 7 days. In A. zantedeschiae, Pycnidia were globose to subglobose or depressed, 120-250 µm in diameter, conidia were hyaline to very pale brown, oval to ellipsoidal, without guttule, 5-9(-6/3) × 2-4(-3/1) µm in diameter and chlamydospore was multicellular. The NCBI BLAST search of ITS, actin and β- tubulin nucleotide sequences of A. zantedeschiae strain isolated from S. lycopersicum showed 99% similarity in three gene region with different A. zantedeschiae isolates. In D. pomorum, Pycnidia usually subglobose with a distinct ostiole, 75-125 µm in diameter, conidia were hyaline, oval to ellipsoidal, guttulate, 5-7(-5/6) × 1/5-2/5(-1/9) µm in diameter and chlamydospore was unicellular and multicellular. The NCBI BLAST search of ITS, actin and β- tubulin nucleotide sequences of D. pomorum strain isolated from S. lycopersicum showed 98%, 100% and 99% similarity with different D. pomorum isolates, respectively.
Keywords
rot, chlamydospores, ITS, actin and &beta, -tubulin