اُاُسپورهای هیبرید Phytophthora infestans (Mont.) de Bary در برگ‌های آلوده‌ از مزارع سیب‌زمینی منطقه‌ی زرین‌گل علی‌آباد کتول استان گلستان

کد مقاله : 2049-23IPPC
نویسندگان
1گرگان، شهرک فرهنگیان، خیابان 5، کوچه 36، پلاک 224، کد پستی: 4914843719
2گرگان، کمربندی، میدان معلم، شهرک فرهنگیان، خیابان پنجم، کوچه 36، پلاک 224، کد پستی: 4914843719
چکیده
اُاُسپورهای هیبرید در نتیجه‌ی تلاقی دو تیپ آمیزشی A1 و A2 از اُاُمیست Ph. infestans تشکیل می‌شوند. هدف از این تحقیق، مشاهده‌ی اُاُسپورهای هیبرید در برگ‌های آلوده و جمع‌آوری شده از مزارع سیب‌زمینی و اثبات حضور تیپ آمیزشی A2 در منطقه‌ی زرین‌گل علی‌آباد کتول استان گلستان بود. در اردیبهشت سال 1397، طی بازدیدهای متعدد از مزارع سیب‌زمینی مناطق غربی استان گلستان، به‌خصوص منطقه‌ی زرین‌گل علی‌آباد کتول، نمونه‌برگ‌های آلوده، با علایم بیماری بادزدگی و به‌ویژه برگ‌هایی با دو ناحیه‌ی نکروز الحاق‌یافته جمع‌آوری و به آزمایشگاه منتقل شد. نمونه‌ها به‌مدت 24 ساعت در دمای °С18 و در شرایط تاریکی در داخل اتاقک‌های مرطوب انکوبه شد. برش‌های کوچک از هر برگ‌چه ( mm210-5) از ناحیه‌ی نکروز و حاشیه‌ی آن تهیه شد. جهت رنگ‌بری و مشاهده‌ی میکروسکوپیک و آشکار اُاُسپورها، نمونه‌ها پس از قرار گرفتن در بشرهای کوچک، در اتانول %96 غوطه‌ور، به مدت 5-3 دقیقه در حمام آبی قرار گرفته، برای 30 دقیقه به حال خود رها شد. نمونه‌ها به سه برابر حجم خود در آب ژاول %10 و به‌مدت یک ساعت غوطه‌ور شد. مشاهدات میکروسکوپ نوری بر اساس 10 بار مشاهده‌ی تصادفی میدان دید میکروسکوپ نوری ( mm22/.) با عدسی شیئی ×10، اُاُسپورها را در محدوده‌ی تعداد 250-51 با شاخص تولید اُاُسپور در حد متوسط (2OPI=) نشان داد. همه‌ی اُاُسپورهای مشاهده شده دارای آنتریدیوم بودند. بنابراین، اُاُسپور بکرزا وجود نداشت. اُاُسپورها 35-25 میکرون قطر و دیواره‌ای ضخیم در اطراف خود داشت. بنابراین، اُاُسپورها از نوع هیبرید بود. جهت اطمینان از حضور تیپ آمیزشی A2، جداسازی و خالص‌سازی بیمارگر بر روی محیط‌های کشت اختصاصی چاودار- بی- آگار با آنتی‌بیوتیک تتراسیکلین و قارچ‌کش بنومیل با غلظت ppm 500 انجام شد. جدایه‌های Ph. infestans با سویه‌ی آزمایش‌گر استاندارد A1 Ph. infestans بر روی محیط کشت اختصاصی چاودار- بی- آگار با عصاره‌ی گوجه‌فرنگی تلاقی و تیپ آمیزشی آن‌ها مشخص شد. تیپ آمیزشی هر جدایه با مشاهده‌ی اُاُسپور هیبرید، A2 و برعکس، A1 تعیین شد. نتایج نشان داد، نسبت فراوانی تیپ آمیزشی A2 به A1، در حدود 1 : 6 به نفع A1 بود. حضور تیپ آمیزشی A2 امکان تولیدمثل جنسی و تنوع ژنتیک را در جمعیت‌های مزرعه‌ای Ph. infestans در منطقه‌ی زرین‌گل علی‌آباد کتول استان گلستان فراهم می‌کند. این امر احتمال ظهور جمعیت‌های پرآزار و مقاوم در برابر قارچ‌کش‌ها را افزایش می‌دهد.
کلیدواژه ها
موضوعات
 
Title
Hybrid oospores of Phytophthora infestans (Mont.) de Bary in the infected leaves from potato fields of Zarrin Gol region of Aliabad-e Katul of Golestan province
Authors
Amir Zolfaghary, Afsaneh Gran
Abstract
Hybrid oospores are formed as a result of the cross of the A1 and A2 two mating types of oomycetes Ph. infestans. The aim of this study was the observation of hybrid oospores in the infected and collected leaves from potato fields and confirmation of the presence of A2 mating type in Zarrin Gol region of Aliabad-e Katul of Golestan province. In May 2017, during the several visits on the potato fields of the western regions of Golestan province, specially in Zarrin Gol region of Aliabad-e Katul, samples with blight symptoms, particularly leaves with two areas of joined together necrosis were collected and transferred to the laboratory. Samples were incubated for 24 hours at 18°C in the dark conditions in wet chambers. The small pieces of each leaflet (5-10 mm2) were prepared from the lesion and it’s margin. To discolour and clearly microscopic observation of oospores, samples after being placed in small beakers, immersed in 96% ethanol, were placed for 3-5 minutes in a water bath and left for 30 minutes. The samples were immersed in three times their volume in 10% sodium hypochlorite for one hour. Optical microscope observations on the base of examination of 10 light microscopic fields (0.2 mm2) at 10x objective lense, showed oospores in the range of 51-250 with oospore production index at medium (OPI=2). All of the observed oospores had antheridium. Therefore, there was no parthenogenetic oospores. Oospores had 25-35 µm in diameter and thick walls around them. Therefore, oospores were hybrid. To ensure the presence of A2 mating type, isolation and purification of the pathogen were conducted on rye B agar culture media with tetracycline antibiotics and benomyl fungicide at 500 ppm. Ph. infestans isolates were paired with standard tester strains A1 Ph. infestans on rye B agar with tomato juice. The mating type of each isolate by observing hybrid oospore was determined A2 and conversely, A1. The results showed that the ratio of the A2 to A1 mating types ratio was approximately 1 : 6 in benefit of A1. The presence of the A2 mating type provide the possibility of sexual reproduction and genetic diversity of Ph. infestans field populations in Zarrin Gol region of Aliabad-e Katul of Golestan province. This increases the probability of emergence virulent population and resistant to fungicides.
Keywords
Hybrid oospore, Leaf, isolate, potato, Phytophthora infestan