جداسازی و شناسایی مولکولی قارچهای طوقه و ریشه نهال‌های صنوبر نهالستان قرق استان گلستان
کد مقاله : 2016-23IPPC
نویسندگان
1خ دیباجی جنوبی - خ شهید تسلیمی - نبش بن بست فریبا - پلاک 58
2گروه گیاهپزشکی ،دانشاه علوم کشاورزی ومنابع طبیعی گرگان،گرگان،ایران
چکیده
کشت و تولید درخت صنوبر در دهه‌های اخیر به دلیل افزایش سطح و اشتغال و توسعه فضای سبز موردتوجه خاصی قرارگرفته است. بیماریهای قارچی خاکزاد همه‌ساله به دلیل اهمیت ازجمله عواملی هستند که علاوه بر کاهش رشد موجب خسارت و پایین آوردن ارزش اقتصادی صنوبر به لحاظ کیفی می گردند. تا کنون بجز بررسی های کلی اقدام خاصی بر روی بیماریهای قارچی طوقه وریشه صنوبر نهالستان قرق انجام نشده است. با توجه به اینکه شناسایی عوامل بیماری‌زا ی قارچی و خسارت زای طوقه وریشه امکان بهبودتولید قلمه ونهال سالم به‌نحومؤثرتری فراهم خواهد نمود و با توجه به نحوه خسارت نیاز به بررسی و انجام مطالعات دقیق تر است. در این بررسی طی بازدیدهای دوره‌ای در فصول پائیز، زمستان و بهار طی سال‌های 1396 و 1397 به‌صورت مشاهده‌ای اقدام به نمونه برداری شد. با توجه به وضعیت رویشی نهال‌ها، نهال‌هایی با علائم آلودگی سوختگی به‌صورت تصادفی انتخاب و از قسمت‌های ساقه، طوقه وریشه نمونه‌برداری انجام و جهت شناسایی به آزمایشگاه منتقل گردید. نمونه ها پس از آماده سازی و ضدعفونی نمودن ابتدا در محیط کشت آب آگار کشت داده و جهت رشد به اتاقک رشد با درجه حرارت متوسط 25 درجه سانتیگراد انتقال داده شد . پس از کشت و رشد ، جداسازی جدایه ها روی محیط کشت سیب زمینی دکستروز آگار خالص سازی نیز انجام شد. استخراج دی ان ای ژنومی با استفاده از روش C-TAB با اندکی تغییر صورت پذیرفت. سپس PCR با استفاده ازپرایمرهای عمومی ITS4و ITS5 انجام گرفته و پس از انجام توالی یابی و BLAST در پایگاه NCBI مورد شناسایی قرار گرفتند. شناسایی مورفولوژیک با استفاده از شاخص های ریخت‌شناسی مانند رنگ کلنی، نوع ریسه ، نوع هاگ، طول و قطر اسپور با استفاده از کلیدهای معتبر قارچ شناسی انجام شد. در این مطالعه هیجده گونه مورد شناسایی قرار گرفت که شامل phaseolina Macrophomina , Alternaria alternata , Diaporthe novem , Schizophyllum commune, Rhizoctonia zeae , Clonostachys rosea , Mucor racemosus , Diplodia mutila , Fusarium acuminatum ,Alternaria burnsii Diaporthe foeniculina , Fusarium solani , F. brachygibbosum F. oxysporum , F. nematophilum, F. proliferatum Cladosporium tenuissimum Cladosporium cladosporioides بودند.
کلیدواژه ها
موضوعات
Title
Isolation and molecular Identification of Popular seedlings fungi of root and crown from Ghorogh nursery in Golestan Province
Authors
Abbas Behshad Esnaashari, Sareh Hatamzade
Abstract
The poplar tree cultivation has been noticed in recent decades, there has been no specific action on the fungal diseases of Popular seedlings from Ghorogh nursery. soil-board pathogens every year due to their importance are among the factors that cause to influence in growth and reduce the economic value of in te Popular rms of quality. Considering the fact that identification of the fungal pathogens of root and crown rot can improve reproduction of healthy seedlings, it will be necessary to study of the Popular fungal pathogens. In this study, periodic visits and sampling was done in autumn and winter of 2017. Regarding the vegetative condition of seedlings, seedlings with symptoms of blight were sampled randomly and transferred to the laboratory for identification. After disinfection, the specimens were cultured on water agar medium and growth at 25 ° C temperature. After isolation and purification of the fungal isolates on PDA medium, genomic DNA extraction was performed with a slight change in C-TAB method. Then, PCR was performed using general ITS4 and ITS5 primers and identified by sequencing and BLAST in the NCBI database. Morphological identification was also performed using morphological indices such as colony color, type of ridge, spores type, and length. Eighteen species of fungi were isolated and identified including: Macrophomina phaseolina , Alternaria alternata , Diaporthe novem , Schizophyllum commune, Rhizoctonia zeae , Clonostachys rosea , Mucor racemosus , Diplodia mutila , Fusarium acuminatum ,Alternaria burnsii Diaporthe foeniculina , Fusarium solani , Fusarium brachygibbosum Fusarium oxysporum , Fusarium nematophilum , Fusarium proliferatum Cladosporium tenuissimum Cladosporium cladosporioides
Keywords
Crown, morphology, Mycoflor, isolate