اولین گزارش از همراهی یک فیتوپلاسما از گروه 16SrVI با بیماری جاروک کلزا
کد مقاله : 2011-23IPPC
نویسندگان
1بندرعباس، بلوار امام خمینی، نبش خیابان طلوع، مرکز تحقیقات و آموزش و منابع طبیعی هرمزگان
2مرکز تحقیقات و آموزش کشاورزی و منابع طبیعی هرمزگان
3استان فارس-زرقان-مرکز تحقیقات و آموزش کشاورزی و منابع طبیعی هرمزگان
چکیده
کلزا (Brassica napus) یکی از دانههای روغنی مهم و دارای اهمیت اقتصادی بالا در سراسر جهان است. در ایران این گیاه از لحاظ سطح زیر کشت و میزان تولید در بین دانههای روغنی از اهمیت ویژهای برخوردار است. در اردیبهشت ماه سال 1397 در بازدیدهای انجام گرفته از مزارع کلزای استان هرمزگان، علائم آلودگی فیتوپلاسمایی شامل جارویی، کوتولگی (کاهش فاصله میانگرهها) و ریز برگی در تعدادی از گیاهان مشاهده شد. برای شناسایی فیتوپلاسمای همراه با بیماری، استخراج دیانای از 2/0 گرم بافت رگبرگ از پنج گیاه دارای علایم و یک گیاه بدون علایم با روش CTAB انجام شد. ردیابی فیتوپلاسما در نمونههای دیانای با استفاده از واکنش زنجیرهای پلیمراز مستقیم و دو مرحله (آشیانهای) انجام شد. در آزمون پیسیآر یک مرحلهای از آغازگرهای P1/P7و در آزمون پیسیآر دو مرحلهای در دور اول از جفت آغازگرP1/P7 و در دور دوم از جفت آغازگر Rl6F2n/R16R2 استفاده شد. در تمام نمونههای دارای علائم در آزمونهای PCR مستقیم و دو مرحلهای قطعات مورد انتظار به ترتیب 1800 و 1250 جفت باز تکثیر شد. تحت همین شرایط در نمونههای فاقد علائم و آب مقطر سترون چنین قطعهای تکثیر نشد. به منظور تایید شناسایی، محصول PCR دو مرحلهای بهطور مستقیم تعیین توالی و با نرمافزارهای مربوطه ویرایش شد. نتایج جستجوی بلاست با استفاده از توالی به دست آمده نشان داد که فیتوپلاسمای همراه با جاروک کلزا (RsWB) بیشترین شباهت را با فیتوپلاسماهایی از گروه 16SrVI (رس شمارهای: KX773529، KP864671 و AM260486) ، Candidatus Phytoplasma trifolii، دارد. در گذشته فیتوپلاسمای همراه با فیلودی کلزا از ایران و سایر نقاط جهان گزارش شده است که از نظر ردهبندی همگی در گروه زردی مینا (16SrI) قرار میگیرند. این اولین گزارش از آلودگی طبیعی گیاهان کلزا به Ca. Phytoplasma trifolii در ایران و جهان است.
کلیدواژه ها
موضوعات
Title
First report of a 16SrVI group phytoplasma associated with rapeseed witches' broom in Iran
Authors
siavash samavi evazi, mohsen amiri mazraie, Mohammad Mehdi Faghihi, Majeed Askari Seyahooei, Abdoolnabi Bagheri
Abstract
Rapeseed (Brassica napus) is an economically important oil crop grown worldwide and in Iran. In April 2018, several rapeseed plants with typical symptoms of phytoplasms diseases were observed in the rapeseed farms of Hormozgan province, Iran. The symptomatic plants showed witches broom, plant stunting (shortened internodes) and little leaves. To identify association of phytoplasma with the symptomatic plants, the total genomic DNA was extracted from 0.2 g midribs of five symptomatic and two asymptomatic plants using modified cetyltrimethylammonium bromide (CTAB) method. The samples were analyzed for phytoplasma DNA by direct PCR using the phytoplasma universal primer pair P1 / P7 and nested PCR using primers P1 / P7 (first round) followed by R16F2n / R16R2 (second round). Amplicons of the expected sizes (1800 and 1250 bp) were amplified with direct and nested-PCR in all symptomatic plants but not from symptomless plant or sterile distilled water as negative controls. A positive nested-PCR product was directly sequenced and edited. BLAST search using sequenced fragment showed that the phytoplasma associated with rapeseed witches' broom (RsWB) had 100 % nucleotide identity with those of phytoplasma members of group 16SrVI (KX773529, KP864671 and AM260486), Candidatus Phytoplasma trifolii. There are several reports regarding association of phytoplasmas diseases with rapeseed (such as rapeseed phyllody phytoplasma) in Iran and other countries, which all are closer to the members of the aster yellows group (16SrI). To our knowledge, this is the first report of natural infection of rapeseed by a 16SrVI phytoplasma in Iran and most probably in the world.
Keywords
Detection, RsWB, 16SrVI