تشکیل اُاُسپورهای هیبرید Phytophthora infestans (Mont.) de Bary در برگ‌های طبقات مختلف گیاه سیب‌زمینی در شرایط آزمایشگاهی

کد مقاله : 1993-23IPPC
نویسندگان
1گرگان، شهرک فرهنگیان، خیابان 5، کوچه 36، پلاک 224، کد پستی: 4914843719
2گرگان، کمربندی، میدان معلم، شهرک فرهنگیان، خیابان پنجم، کوچه 36، پلاک 224، کد پستی: 4914843719
چکیده
اُاُسپورهای هیبرید در نتیجه‌ی تلاقی دو تیپ آمیزشی A1 و A2 از اُاُمیست Ph. infestans تشکیل می‌شوند. هدف از این تحقیق، مطالعه‌ی تفاوت تراکم اُاُسپورهای هیبرید در برگ‌های جداشده‌ی طبقات مختلف گیاه سیب‌زمینی در اتاقک‌های مرطوب بود. در بهار سال 1396، طی بازدیدهای متعدد از مزارع سیب‌زمینی مناطق غربی استان گلستان، نمونه‌برگ‌های آلوده و با علایم بیماری بادزدگی جمع‌آوری و به آزمایشگاه منتقل شد. جداسازی و خالص‌سازی بیمارگر بر روی محیط‌های کشت اختصاصی چاودار- بی- آگار با آنتی‌بیوتیک تتراسیکلین و قارچ‌کش بنومیل با غلظت 500ppm انجام شد. جدایه‌های Ph. infestans با سویه‌ی آزمایش‌گر استاندارد A1 Ph. infestans بر روی محیط کشت اختصاصی چاودار- بی- آگار با عصاره‌ی گوجه‌فرنگی تلاقی و تیپ آمیزشی آن‌ها مشخص شد. تیپ آمیزشی هر جدایه با مشاهده‌ی اُاُسپور هیبرید، A2 و برعکس، A1 تعیین شد. سه جفت جدایه‌ی A1 و A2 با شاخص تولید اُاُسپور در حد بسیار زیاد (OPI=4)، بر اساس 10 بار مشاهده‌ی تصادفی میدان دید میکروسکوپ نوری ( mm22/.) با عدسی شیئی ×10 انتخاب شد. سوسپانسیون زئوسپورانژیومی از حاشیه‌ی کشت هفت روزه‌ی هر جدایه در آب مقطر استریل تهیه و جهت خروج زئوسپورانژیوسپورها به مدت دو ساعت در یخچال با دمای °С4 قرار داده شد. مایه‌تلقیح هر جدایه در غلظت 7-5 زئوسپورانژیوسپور در میدان دید میکروسکوپ نوری با عدسی شیئی ×10 تهیه شد. پیش از مرحله‌ی گل‌دهی، تعداد 45 برگ‌چه‌ی سالم از طبقات پایین بوته‌های سیب‌زمینی رقم حساس آگریا، به همان تعداد از برگ‌چه‌های طبقات میانی و فوقانی انتخاب و پس از ضدعفونی سطحی با اتانول %70 و آب ژاول %5، جهت آلوده‌سازی، در داخل اتاقک‌های مرطوب (تشتک‌های پتری)، پشت به رو قرار گرفت. هر برگ‌چه با یک قطره ( µL20) از سوسپانسیون زئوسپورانژیوسپوری مخلوط از هر دو تیپ آمیزشی A1 و A2 با استفاده از پی‌پت پاستور تلقیح شد. آزمایش در قالب طرح کاملن تصادفی با نه سوسپانسیون (تیمار) و در پنج تکرار انجام شد. تشتک‌های پتری تلقیح شده در دمای °С18 به‌مدت 20 روز و در شرایط تاریکی انکوبه شد. برش‌های کوچک از هر برگ‌چه
( mm2 5-10 ) از ناحیه‌ی نکروز و حاشیه‌ی آن تهیه شد. جهت مشاهده‌ی آشکار اُاُسپورها در مزوفیل، نمونه‌ها با استفاده از اتانول %96 و آب ژاول %10 رنگ‌بری شد. نتایج تحقیق اختلاف معنی‌دار در شاخص تولید اُاُسپور (OPI) در سطح آماری (p<0.001) بین برگ‌های طبقات پایینی و میانی با بالایی هر بوته را نشان داد. بیش‌ترین تراکم اُاُسپور (4=OPI) در برگ‌های طبقات پایینی و میانی و کم‌ترین (1=OPI) در برگ‌های بالایی هر بوته مشاهده شد. در بین برگ‌های طبقات پایینی و میانی هر بوته، تفاوتی معنی‌دار در OPI در سطح آماری (p<0.05) وجود نداشت. نتایج این تحقیق برای تنظیم سطوح پخش قارچ‌کش بین طبقات فوقانی، میانی و پایینی برگ‌های گیاهان سیب‌زمینی در مزارع مفید خواهد بود.
کلیدواژه ها
موضوعات
 
Title
Formation of hybrid oospores Phytophthora infestans (Mont.) de Bary in the various layers leaves of potato plant in vitro
Authors
Amir Zolfaghary, Afsaneh Gran
Abstract
Hybrid oospores are formed as a result of the cross of the A1 and A2 two mating types of oomycetes Ph. infestans. The aim of this study was the density defference of hybrid oospores in the detached leaves of the various layers of potato plant in wet chambers. In spring 2017, during the several visits on the potato fields of the western regions of Golestan province, samples with blight symptoms were collected and transferred to the laboratory. Isolation and purification of pathogen were conducted on rye B agar culture media with tetracycline antibiotics and benomyl fungicide at 500 ppm. Ph. infestans isolates were paired with standard tester strains A1 Ph. infestans on rye B agar with tomato juice. The mating type of each isolate by observing hybrid oospore was determined A2 and conversely, A1. Three pairs of A1 and A2 isolates with oospore production index at very high (OPI=4), on the base of examination of 10 light microscopic fields (0.2 mm2) at 10x objective lense were selected. Zoosporangium suspension was prepared from the edge of 7-day-old culture of each isolate in sterile distilled water and placed in a refrigerator at 4°C for two hours to leave the zoosporangiospores. Inoculum of each isolate was prepared in concentration of 5-7 zoosporangia. Before the flowering stage, in total 45 healthy leaflets were selected from the lower layers of potato plants of sensitive cultivar Agria, 45 leaflets of the middle and upper layers and after surface sterilization with 70% ethanol and 5% sodium hypochlorite, for infestation, were placed upside down in wet chambers (Petri dishes). Each leaflet was inoculated with one drop (20 µL) of zoosporangiospore suspension from both A1 and A2 mating types using a Pasteur pipet. The experiment was carried out in a completely randomized design with nine suspensions (treatment) and five replications. Inoculated Petri dishes were incubated at 18°C for 20 days in the dark conditions. The small pieces of each leaflet (5-10 mm2) were prepared from the lesion and it’s margin. To observe clearly oospores in the mesophyll, the samples were dyed using 96% ethanol and 10% sodium hypochlorite. The results of the study showed a significant difference of OPI at (p <0.001) between the lower and middle layers leaves with the upper of each plant. The highest density of oospore (OPI=4) was observed in the lower and middle layers leaves and lowest (OPI=1) in the upper layers leaves of each plant. There was on significant difference in OPI between the lower and middle layers leaves at (p <0.05). The results of this study will be useful for adjusting the levels of fungicide distribution between the upper, middle and lower layers leaves of potato plants in the fields.
Keywords
Oospore, Leaf, isolate, potato, Phytophthora infestans