بررسی عامل بیماری پژمردگی و زوال گیاه به لیمو در استان مازندران
کد مقاله : 1978-23IPPC
نویسندگان
1گرگان دانشگاه کشاورزی و منابع طبیعی، بخش گیاهپزشکی
2عضو هیات علمی
3دانشجوی دکترا، دانشگاه آزاد واحد علوم و تحقیقات
چکیده
گیاه به لیمو با نام علمی Lippia citrodora Kunt، گیاهی دارویی از خانواده شاهپسند می باشد. طی بازدیدهایی از مناطق کشت این گیاه در استان مازندران در سالهای 1394-1395، علائمی نظیر پژمردگی، خشکیدگی کامل گیاه و پوسیدگی ریشه و طوقه گیاهان مشاهده شد. به طوریکه در برش عرضی بافت ها آوندهای تیره قابل رویت بود. نمونه برداری از بافت های مشکوک به بیماری و خاک اطراف ریشه و طوقه ها انجام شد به آزمایشگاه منتقل گردید و پس از ضدعفونی سطحی با آب و هیپوکلریت سدیم 5/0 درصد در محیط کشت های PDA، CzaPek، SDA و CMA کشت و در دمای 25 درجه سانتی گراد همراه با نور متناوب نگه داری گردید. پس از ظهور کلنی ها از طریق نوک ریسه یا تک اسپور در روی محیط کشت WA اقدام به خالص سازی گردید وبر روی SDA منتقل و در 4 درجه سانتی گراد برای بررسی های بعد نگه داری گردید و براساس خصوصیات ظاهری و مورفولوژیک و با استفاده از کلیدهای معتبر شناسایی شدند. خاک مزارع آلوده نیز با تهیۀ محلول خاک در محیط آب آگار، نیم گرم در یک لیتر، بررسی و سپس قارچ عامل بیماری جدا شد. پرگنه قارچ در محیط کشت PDA در ابتدا به رنگ سفید مایل به خاکستری و بعد از چند هفته به رنگ سیاه مشاهده شد. پرگنه در دمای متوسط 20 تا 30 درجه سانتیگراد رشد خوبی داشتند و روی آنها پس از چند هفته نقاط سیاهرنگی تشکیل شد که میکرواسکلرت قارچ بود. بر اساس مشخصات میکروسکوپی بویژه فیالیدها، کنیدی ها و سایر مشخصات ظاهری و تشکیل میکرواسکلرت، این قارچ به گونه Verticillium dahlia kleb. تعلق داشت. آزمون بیماری‌زایی با فرو بردن ریشه گیاهان سالم در سوسپانسون اسپوری به غلظت 4*106 اسپور در میلیلیتر وسپس کاشت گیاه در گلدان حاوی خاک اتوکلاو شده انجام شد. در جهت تایید بررسی‌های مورفولوژیک، پس از استخراج DNA میسلیوم قارچ ، با آغازگرهای عمومی و اختصاصی تکثیر و محصول PCR توالی یابی گردید. پس از دریافت نتایج از توالی یابی، توالی‌ها با مترادف های موجود در بانک ژن با استفاده از نرم افزار nc-BLAST بلاست گردید. نتایج حاصل از بلاست نشان دهنده شباهت 98 درصدی جدایه‌ها با توالی‌های Verticillium dahlia kleb موجود در بانک ژن بودند.
کلیدواژه ها
موضوعات
Title
Identification of the Causal Agent of Die Back and Decline of Lemon verbena in mazandaran
Authors
Parsa Teymuri, seyyed vahid alavi, Faezeh Falaki
Abstract
Lemon verbena( Lippia citrodora Kunt) is a medicinal plant from the mangrove family.during the visit of cultivation areas of this plant in mazandaran province in 2016 - 2017 symptoms such as blight, plant reduction and root decay and collar of plants were observed. so that it was visible in the transverse cutting of the tissues of the dark vessels. The sampling from suspected tissue to disease and soil was carried out to the laboratory, and after disinfection with water and sodium hypohloride was cultured medium PDA، CzaPek، SDA و CMA and kept at 25C with periodic lighting. after the advent of coloniesا with hyphae on the WA culture medium , purification was carried out on SDA and stored in 4 c for subsequent examination and were identified based on the apparent features and morphological features using valid keys. Infection soil was also separated by the preparation of the soil solution in agar water environment, warm in one litre, and then the cause of the disease. The fungus in the PDA culture medium was first seen as a white - to - gray color and after a few weeks of black color.The fungal isolates were purified and identified as Verticillium dahlia, based on the morphological characteristics. Pathogenicity test was done by plunge the root of healthy plants in spore suspension. Genomic DNA extraction was done from the fungal isolates and amplification was done with specific primers .The amplicons were sequenced and compared with the available sequences in GenBank (NCBI). BLAST analysis showed 98% nucleotide similarity between the isolates and Verticillium dahlia.
Keywords
Lippia citrodora Kunt،mazandaran, vericillium