مطالعه ای بر تنوع قارچ‌های اندوفیت سرخدار در استان گلستان
کد مقاله : 1959-23IPPC
نویسندگان
1پنج آذر آذر یکم عطایی یک پلاک 20
2بخش تحقیقات رستنیها، موسسه گیاهپزشکی کشور، تهران
چکیده
گونه Taxus baccata در دنیا کمیاب و از نادر سوزنی‌برگان بومی ایران است. سرخدار در جنگل‌های هیرکانی به صورت پراکنده و تنها در مناطق پونه‌آرام و افراتخته از توابع علی‌آباد کتول تشکیل جنگل‌های خالصی را می‌دهد. قارچ‌های اندوفیت سرخدار قادر به تولید ترکیب ضدسرطان بنام پاکلی‌تاکسل خارج از میزبان گیاهی می‌باشند. اندوفیت‌ها بدون نشانه‌ای از حضورشان با تولید متابولیت‌های ثانویه باعث افزایش مقاومت به تنش‌های زنده و محیطی می‌شوند. به منظور بررسی تنوع قارچ‌های اندوفیت، طی سال‌های 93 و 94، نمونه‌هایی سالم از برگ، سرشاخه و پوست تنه سرخدار از مناطق مختلف استان گلستان شامل روستای زیارت و افراتخته، جنگل توسکستان، جاده چهارباغ و ذخیره گاه پونه آرام جمع آوری شدند. پس از انتقال به آزمایشگاه ابتدا نمونه‌ها زیر جریان آب به مدت پنج دقیقه شستشو و به قطعات پنج میلی متری بریده و به مدت سه دقیقه در هیپوکلریت سدیم یک درصد و دو دقیقه در اتانول 70 درجه سترون شدند. سپس با آب مقطر اتوکلاو شده سه بار شستشو و روی کاغذ صافی خشک شدند. پوست رویین برداشته و بافت زیرین قطعات در محیط‌های کشت WA، PDA و CMA حاوی 200 پی پی ام کلرامفنیکل کشت و در انکوباتور در دمای 1±24 درجه سلسیوس و تاریکی مطلق نگهداری شدند. جدایه‌هایی که زودتر از دو هفته ظاهر شدند حذف گردید. هر جدایه با تکنیک نوک ریسه خالص گردید. بر اساس خصوصیات ریخت شناسی، منطقه نمونه برداری و اندام گیاهی، از مجموع بیش از 200 کشت قارچی خالص تعداد 27 جدایه جهت مطالعات تکمیلی مولکولی انتخاب شدند. بر این اساس آرایه‌های قارچی به شرح زیر شناسایی شدند: Alternaria alternata، A. tenuissima، Ascochyta medicaginicola، Didymella glomerata، D. heteroderae، Dothiorella gregaria، D. sarmentorum، Fusarium avenaceum، F. oxysporum، F. tricinctum، Hamigera insecticola، Mucor circinelloides، Nemania serpens، Neocucurbitaria rhamni، Nigrospora oryzae، Nothophoma quercina، Penicillium citrinum، Periconia macrospinosa و Rosellinia corticium. در این میان جنس Alternaria با هفت جدایه، Fusarium با پنج جدایه، Dothiorella با سه جدایه و Didymella با دو جدایه بیش‌ترین جدایه ها را شامل شدند. جدایه های بدست آمده در فرم جنسی همگی متعلق به شاخه Ascomycota و زیر شاخه Ascomycotina می‌باشند. گونه آنامورف Mucor circinelloides از معدود گزارشات اندوفیتی سرخدار متعلق به شاخه Zygomycota است. 17 جدایه متعلق به رده Dothideomycetes، نه جدایه متعلق به رده Sordariomycetes، دو جدایه متعلق به رده Eurotiomycetes و یک جدایه متعلق به رده Lecanoromycetes می‌باشند. راسته‌های Pleosporales (13 جدایه)، Hypocreales (پنج جدایه)، Botryosphaeriales (سه جدایه)، Xylariales و Eurotiales (دو جدایه)، Caliciales و Diaporthales (یک جدایه) بیش‌ترین فراوانی جدایه را داشتند. خانواده Pleosporaceae (هفت جدایه)، Nectriaceae (پنج جدایه)، Didymellaceae (چهار جدایه)، Botryosphaeriaceae (سه جدایه)، Aspergillaceae و Xylariaceae (دو جدایه) و Caliciaceae، Cucurbitariaceae و Gnomoniaceae (یک جدایه) به ترتیب بیش‌ترین حضور را در میان جدایه‌ها داشتند.
کلیدواژه ها
موضوعات
Title
A Study on the Diversity of Endophyte Fungi in Golestan Province
Authors
Mohammad Reza Ahmadi, rasoul Zare
Abstract
Taxus baccata is rare in the world and is one of the infrequent native species of Iran. Yew is sparse distributed in the Hyrcanian forests and only form pure masses in the regions of Punearam and Afratakhte of Ali Abad Katoul. Yew endophytic fungi can produce an anti-cancer compound called paclitaxel in-Vitro. Endophytes increase the resistance to biotic and abiotic stresses by producing secondary metabolites without any indication of their presence. In order to investigate the diversity of endophytic fungi, healthy samples from leaves, twigs and bark from different regions of Golestan province including Ziarat and Afratkhteh village, Tuskestan forest, Chaharbagh road and Puneh-Aram reserver during 2014 and 2015.At the first in laboratory the specimens were washed under tap running water for five minutes, then were cut into five mm segments, afterthat surface strillize was performed by Hypochlorite Sodium 1% for three minutes and Ethanol 70ο for two minutes, finally were rinsed with sterile distilled water three times and were dried upon filter paper. Upper cortex was discarded and samples was placed on WA, PDA and CMA containing 200 ppm Chloramphenicol. Petri dishes were incubated at 24οC±1 in the continuous darkness. Fungal isolates were purified by using hyphal tip method. Among more than 200 fungal cultures, 27 isolates were selected on the basis of morphological charactristics, sampling region and plant tissue for complementary molecular studies. Fungal taxa were determined as follow: Alternaria alternata، A. tenuissima، Ascochyta medicaginicola، Didymella glomerata، D. heteroderae، Dothiorella gregaria، D. sarmentorum، Fusarium avenaceum، F. oxysporum، F. tricinctum، Hamigera insecticola، Mucor circinelloides، Nemania serpens، Neocucurbitaria rhamni، Nigrospora oryzae، Nothophoma quercina، Penicillium citrinum، Periconia macrospinosa and Rosellinia corticium. The genus Alternaria (seven Isolates), Fusarium (five isolates), Dothiorella (three isolates) and Didymella (two isolates) have most frequent, respectively. All isolates blonging to Ascomycota and Ascomycotina. Number of 17, nine, two and one of fungal isolates belonging to Dothideomycetes, Sordariomycetes, Eurotiomycetes and Lecanoromycetes, respectively. The orders Pleosporales (13), Hypocreales (five), Xylariales and Eurotiales (two), Caliciales and Diaportales have maximum frequent, respectively. The Family Pleosporaceae (seven), Nectriaceae (five), Didymellaceae (four), Botryosphaeriaceae (three), Aspergillaceae and Xylariaceae (two), Caliciaceae and Cucurbitariaceae and Gnomoniaceae (One) have maximum occurrence of isolates.
Keywords
Keywords: Yew, endophyte, Fungus, Folestan province, Ascomycota