تنوع قارچ‌های اندوفیت حاصل از گل محمدی (Rosa damascena) در ایران
کد مقاله : 1877-23IPPC
نویسندگان
1کرج- چهار راه مصباح – بلوار امامزاده حسن – ساختمان بنیان – پلاک 796 – طبقه چهارم – واحد 16- کد پستی 3134758635
2دانشگاه تهران
چکیده
جنس Rosa متعلق به خانواده گل سرخیان می‌باشد که در حدود ۲۰۰ گونه گیاهی دارد. در بین آن‌ها گل محمدی به عنوان گونه اصلی شناخته می‌شود که از اسانس آن در صنایع بهداشتی، دارویی و غذایی مورد استفاده قرار می‌گیرند. اندوفیت‌ها طیف وسیعی از قارچ‌های بیمارگر گیاهی و ساپروفیت را شامل می‌شود که دوره‌ی نهفتگی طولانی قبل از ظهور علائم خارجی بیماری دارند که برای برقراری رابطه ی همزیستی ضروری است. اندوفیت ها منبع غنی از متابولیت های فعال زیستی هستند. جهت جداسازی و شناسایی برخی از قارچ های اندوفیت گیاه دارویی گل محمدی (Rosa damascena) در ایران، نمونه برداری در طی فصل پاییز سال 1396 از شاخه ها و برگ های سالم گیاهان واقع در استان‌های اصفهان، آذربایجان شرقی، البرز، سیستان و بلوچستان، زنجان، کرمان و مازندران انجام گرفت. پس از انتقال نمونه های گیاهی به آزمایشگاه، ابتدا نمونه های گیاهی به مدت 15 دقیقه زیر جریان ملایم آب شیر با توری شسته شدند. سپس چهار تا پنج مرتبه با آب مقطر استریل آب شویی گردیدند. نمونه های گیاهی به منظور ضد عفونی سطحی، به مدت یک دقیقه در اتانول 70 درصد قرار داده شدند. سپس نمونه‌های برگ به مدت یک دقیقه در محلول هیپوکلریت سدیم دو درصد و نمونه‌های شاخه به مدت سه دقیقه در این محلول قرار داده شدند. در ادامه نمونه‌ها با آب مقطر استریل شستشو داده شدند و مجدد یک دقیقه در اتانول 70 درصد ضد عفونی شده و در نهایت با آب مقطر استریل شسته شدند. نمونه‌های گیاهی پس از خشک شدن روی دستمال کاغذی سترون، به قطعات کوچک بریده شدند و روی محیط کشت آب آگار دو درصد حاوی آنتی بیوتیک کلرامفنیکل و جنتامایسین قرار داده شدند و به مدت هفت الی 40 روز درون انکوباتور با دمای 25 درجه سلسیوس و شرایط تاریکی مداوم نگهداری شدند. خالص سازی جدایه های قارچی بدست آمده به روش نوک هیف صورت گرفت. در مجموع 250 جدایه قارچی استحصال گردید. بر اساس ویژگی‌های ریخت شناختی و تجزیه و تحلیل‌های مولکولی با استفاده از نواحی ژنی ITS-rDNA، β-tubulin (BenA) ، آرایه‌های قارچی Aspergillus ochraceus، Aspergillus flavus، Aspergillus tubingensis، Penicillium brevicompactum ، Acremonium spp.، Alternaria spp.، .Bipolaris sp، Chaetomium spp.، Cladosporium spp.، Colletotrichum sp.، Coniothyrium sp.، Cytospora sp.، Fusarium sp.، sp. Microsphaeropsis، Pestalotiopsis sp. وTrichoderma sp. شناسایی گردیدند. تمامی تاکسون‌های شناسایی شده در این تحقیق برای نخستین بار به عنوان قارچ اندوفیت از گل محمدی در دنیا گزارش می‌شوند.
کلیدواژه ها
موضوعات
Title
Diversity of endophytic fungi of Damask rose (Rosa damascena) in Iran
Authors
Omid Atghia, Khalil Berdi Fotouhifar
Abstract
The genus Rosa belonging to Rosaceae family, include over 200 species. Among them, Rosa damascene Mill. is a unique species, used in health, pharmaceutical and food industries. Endophytes are a wide range of plant pathogenic and saprophytic fungi that have a long latent period prior to the onset of external symptoms that are necessary for the establishment of a symbiotic relationship. Many endophytes have the potential to synthesize various bioactive metabolites. In order to isolation and identification of endophytic fungi of Damask rose (Rosa damascena) in Iran, during autumn of 2017, some specimens from healthy twigs and leaves of the bushes were collected from Isfahan, East Azerbaijan, Alborz, Sistan and Baluchistan, Zanjan, Kerman and Mazandaran provinces. After washing with running tap water for 15 min and four and five times with sterile distilled water, plant materials surface sterilized with 70% ethanol for 1 min, 2% sodium hypochlorite solution for 1 min for leaves and 3 min for twigs, then rinsing with sterile distilled water for 1 min and 70% ethanol for 1 min, followed by final rinsing with sterile distilled water for 1 min. Plant materials were cut in small pieces after drying and were placed on 2% WA amended with chloramphenicol, gentamicin and were kept at 25ºC in continuous dark condition for 7-40 days. Fungal isolates were purified using hyphal tip method. A total number of 250 isolates were isolated. Based on morphological characteristics and molecular analysis with ITS-rDNA and β-tubulin (BenA) gene sequences, different fungal taxa including Aspergillus ochraceus, Aspergillus flavus, Aspergillus tubingensis, Penicillium brevicompactum, Acremonium spp., Alternaria spp., Bipolaris sp., Chaetomium spp., Cladosporium spp., Colletotrichum sp., Coniothyrium sp., Cytospora sp., Fusarium sp., Microsphaeropsis sp., Pestalotiopsis sp. and Trichoderma sp. were identified. All identified taxa are reported as new endophytic fungi of damask rose for the first time in the world.
Keywords
Biodiversity, Identification, morphology, Molecular phylogeny, medicinal plant