جداسازی و شناسایی استرامنوپیل‌های آب‌زی ساپرولگنیایی در استان‌های فارس و کرمانشاه

کد مقاله : 1869-23IPPC
نویسندگان
1فارس، شیراز،کیلومتر 12 جاده اصفهان- شیراز. باجگاه دانشکده کشاورزی. بخش گیاهپزشکی
2دانشگاه شیراز- دانشکده کشاورزی- بخش گیاهپزشکی
چکیده
راسته ساپرولگنیالز شامل گونه‌های بیمارگر گیاهان آب‌زی، خشکی‌زی و جانوران آب‌زی از جمله ماهی‌هاست. این شبه‌قارچ‌های استرامنوپیلایی نقش مهمی در فرآیند‌های تخریب بستره‌های مواد آلی و فرآیندهای زیست‌شناختی خودپالایی در زیست‌بوم‌های آب‌ شیرین ایفا می‌کنند. در این مطالعه به منظور جداسازی و شناسایی این شبه‌قارچ‌های آبزی، نمونه‌هایی از برگ‌ها و چوب‌های پوسیده و قهوه‌ای از مناطق مختلف استان‌های فارس و کرمانشاه (سپیدان، تنگ‌سرخ، شش‌پیر، دلخان، برغان، صحنه، هرسین، بیستون و پاوه) در پاییز و زمستان 1396 به آزمایشگاه منتقل شد. نمونه‌ها، پس از شستشو و قطعه‌قطعه‌شدن به تشتک‌های پتری ‌ضدعفونی ‌شده حاوی آب مقطر سترون و چند بذر شاهدانه سترون منتقل و در 15 تا 20 درجه‌ی سلسیوس قرار داده شدند. پس از هفت تا 14 روز، شاهدانه‌های‌ کلنیزه شده، پس از شستشو با آب مقطر سترون، به محیط‌کشت عصاره‌ی ذرت-آگار مننقل شدند. خالص‌سازی جدایه‌ها، با استفاده از محیط-کشت آب-آگار و روش نوک‌ریسه‌کردن انجام شد. شناسایی گونه‌ها بر اساس ویژگی‌های ریخت‌شناختی، ریخت‌سنجی و فیزیولوژیکی و مطالعات فیلوژنتیکی انجام شد. شناسایی اولیه جدایه‌ها با استفاده از کتاب راهنمای قارچ‌های آبزی (Khulbe 2001) انجام شد. گونه‌های شناسایی شده بر اساس فاصله‌ی ترانویسی شده‌ی داخلی (آی‌تی‌اِس) دی‌اِن‌اِی ریبوزومی جدایه‌ها، توالی‌سنجی و با روش بیشینه‌ی درست-نمایی واکاوی فیلوژنتیکی شدند. بر اساس داده‌های به دست آمده شش گونه ساپرولگنیا و یک گونه‌ی آکلیا شناسایی شد. این گونه‌ها شامل: Saprolegnia parasitica، S. frax، S. anomalies ، S. australis، S. mixta، sp. Saprolegnia و Achlya americana بودند. گونه‌های S. anomalies ، S. australis، S. mixta، sp. Saprolegnia و Achlya americana برای مایکوبیوتای ایران جدید بودند.
واژگان کلیدی: مواد آلی، ساپرولگنیا، فاصله‌ی ترانویسی شده‌ی داخلی ژن آراِن‌اِی ریبوزومی.
کلیدواژه ها
موضوعات
 
Title
Isolation and identification of aquatic saprolegnious stramenopiles in Fars and Kermanshah Provinces
Authors
Zeinab Bolboli, Reza Mostowfizadeh-Ghalamfarsa
Abstract
The order Saprolegniales includes pathogenic species of aquatic and terrestrial plants and aquatic animals including fish. These Straminipilous fungi play an important role as a decomposing component which participates in the destruction processes of organic substrates and self-cleaning biological processes in freshwater ecosystems. In this study, in order to isolation and identification of these Straminipilous fungi, samples of brown decayed twigs, leaves and woods from various places of Fars and Kermanshah Provinces, Iran (Sepidan, Dalkhan, Bahreghan, Tang-e-Sorkh, Sheshpir, Sahneh, Harsin, Bisotun and Paveh) were transferred to the laboratory during the fall and winter 2017. The samples were rinsed in distilled water, cut off into segments, were placed in sterilized water in Petri dishes containing several halves of hemp seeds (Cannabis sativa), and incubated at room temperature (15-20 °C). After 7- 14 days, the colonized hemp seed baits, were rinsed in distilled water then transferred to Cornmeal Agar medium. Purification of isolates was carried out using a Water-Agar culture medium and conducting hyphal-tip. Primary identification was carried out using: A Manual of Aquatic Fungi (Khulbe 2001). Species were identified based on morphological and morphometric characteristics of sexual and asexual organs as well as the physiological and phylogenetic studies. Identified species were sequenced based on the internal transcribed spacer (ITS) region of rDNA and were analyzed phylogenetically by Maximum Likelihood method. Six species of Saprolegnia and one species of Achlya were identified including: Saprolegnia parasitica, S. frax, S. anomalies, S. australis, S. mixta, Saprolegnia sp. and Achlya americana. Saprolegnia anomalies, S. australis, S. mixta Saprolegnia sp. and Achlya americana were new to Iran mycobiota.
Keywords
organic substrates, Saprolegnia, rDNA ITS gen