ردیابی سرولوژیکی و مولکولی ویروس موزاییک معمولی بافت مرده لوبیا (BCMNV) از مناطق لوبیا کاری شهرستان ارومیه

کد مقاله : 1847-23IPPC
نویسندگان
1کرمان-رفسنجان-دانشگاه ولی عصر (عج)
2دانشگاه ولی عصر عج رفسنجان
3، دانشگاه ولی‌عصر(عج)رفسنجان
4دانشگاه ارومیه
5دانشگاه ولی‌عصر(عج)رفسنجان
چکیده
حبوبات (Leguminosae) پس از غلات، مهم‌ترین منبع غذایی بشر را تشکیل داده و از میان آن‌ها لوبیا یکی از منابع مهم پروتئین و تولید انرژی برای انسان می‌باشد. بیماری‌های لوبیا در جهان به‌طور میانگین سالانه باعث کاهش محصول لوبیا به میزان ده درصد می‌شوند. از بین این بیمارگرها، ویروس‌های زیادی وجود دارند که به‌صورت جهانی به لوبیا خسارت می‌زنند که از مهمترین این بیماری‌های ویروسی می‌توان به ویروس موزاییک معمولی بافت مرده لوبیا (Bean common mosaic necrosis Virus, BCMNV) اشاره کرد. در همین راستا، به‌منظور ردیابی و شناسایی BCMNV در لوبیاکاری‌های شهرستان ارومیه، گیاهان دارای علایم ویروسی طی فصل زراعی سال 1396 جمع‏آوری و به‌‏صورت جداگانه با ثبت نام محل و تاریخ نمونه‏برداری در کیسه‏های پلاستیکی مخصوص قرار داده شده و در مجاورت یخ به آزمایشگاه منتقل گردیدند. علایمی که در مزرعه مشاهده شدند شامل زردی، بدشکلی، پیچیدگی، موزاییک، کوتولگی و ابلقی ‌شدن برگ‌های لوبیا بودند. نمونه-های فوق با استفاده از آزمون الیزا و به کمک آنتی‌بادی اختصاصی مورد بررسی قرار گرفتند. بر اساس نتایج الیزا، تعداد ده مورد از نمونه‌های مورد آزمون دارای واکنش مثبت با آنتی‌بادی اختصاصی ویروس بودند. این نمونه‌ها با استفاده از روش رونوشت‌برداری معکوس و واکنش زنجیره‌ای پلیمراز (RT-PCR) و به کارگیری آغازگرهای اختصاصی پروتئین پوششی ویروس BCMNV مورد بررسی تکمیلی قرار گرفتند. نتایج حاصل، نشان‌دهنده‌ی تکثیر یک قطعه دی.ان.ای به طول مورد انتظار (900 جفت باز) در 6 نمونه بود. این نمونه‌ها پس از استخراج از ژل آگارز مورد تعیین توالی قرار گرفتند. بررسی توالی‌های به دست آمده با استفاده از ابزار جسنجوی BLAST در پایگاه اطلاعاتی NCBI، نشان‌دهنده‌ی مطابقت بالای 99 درصدی آن با توالی‌های BCMNV ثبت شده در بانک ژن (Genbank) از مناطق مختلف دنیا بود.
کلیدواژه ها
موضوعات
 
Title
Serological and molecular detection of Bean common mosaic necrosis virus (BCMNV) in bean fields of Urmia (Iran)
Authors
ali baradar, ahmad hosseini, samin hosseini, mina rastgou, somayeh abdani
Abstract
Legumes (Leguminosae) are the most important food source after cereals and among them, beans are one of the most important sources of protein and energy for humans. Diseases in the world reduce more than 10% of total bean production. Among these pathogens, there are many viruses that harmful to beans, one of the most important of these viral diseases is Bean common mosaic necrosis virus (BCMNV). The virus is from the Potyviridae family and the Potyvirus genus. In order to detection and identification of Bean common mosaic necrosis virus in Urmia bean Fields, plants with viral symptoms were collected during the 2018 growing season and the location and date of sampling registered on special plastic bags individually. Symptoms that were observed on the bean fields included yellowing, malformation, curly top, mosaics, mottling and stunting. Collected samples were analyzed by DAS-ELISA test using BCMNV specific antibody. Based on the results of ELISA, The 10 of the tested samples had positive reaction with specific virus antibodies. These samples were subjected to complementary study using reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) and using specific primers for coat protein of Bean common mosaic necrosis virus. The results showed the amplification of a DNA fragment with an expected length (900 bp) in 6 samples. Analysis of the obtained sequences using the BLAST tools in NCBI web site and it comparison with available sequences in GenBank showed 99% similarity with the previously reported sequences about BCMNV from other parts of the world. The results of taxonomical research will be determined in the future.
Keywords
ELISA, RT-PCR, sequencing