شناسایی مولکولی قارچ‌های اندوفیت از سه گونه گیاه دارویی Papaver spp. ‬‏ از تیره خشخاش

کد مقاله : 1817-23IPPC
نویسندگان
1گرگان. عدالت98 فرعی اول مجتمع رضوان
2گرگان، شهرک فرهنگیان، خیابان 5، کوچه 36، پلاک 224، کد پستی: 4914843719
34. Head of laboratory of plant pathology and botany, Gorgan branch, Islamic Azad University, Gorgan, Iran
چکیده
فلور گیاهان دارویی تیره خشخاش در استان گلستان متنوع و حاوی ترکیبات مورد نظر صنعت داروسازی است. قارچ‌های اندوفیت درون بافت این دسته از گیاهان بدون اینکه علائم قابل مشاهده‌ای را نشان دهند، زندگی می‌کنند. تشخیص و تمایز قارچ‌های بیمارگر گیاهی و همزیست از هم واضح نیست و تعامل بین قارچ و گیاه میزبان اغلب متغیر است. به‌منظور شناسایی قارچ‌های اندوفیت ازسه گونه Papaver chelidoniifolium، Papaver pavoninum و Papaver rhoeas ‬‏از تیره خشخاش، نمونه‌های گیاهی کاملا سالم از بوته‌های سالم در طول بهار و تابستان سال 1396 در استان گلستان نمونه برداری شدند. جداسازی قارچ اندوفیت از محل گره نمونه‌های ساقه انجام گردید. ضدعفونی سطحی نمونه‌ها به ترتیب با استفاده از اتانول ٪70 به مدت 45 ثانیه، هیپوکلریت سدیم یک درصد به مدت 30 ثانیه و سپس سه بار شستشو با آب مقطر سترون انجام گرفت. نمونه‌ها در تشتک‌های پتری حاوی محیط کشت سیب زمینی-دکستروز-آگار کشت و به مدت 4 هفته در انکوباتور با دمای 25°Cنگهداری شدند. پس از خالص سازی با روش تک اسپور و نوک هیف، هر یک از جدایه‌ها به کمک خصوصیات مورفولوژیک با استفاده از کلیدهای شناسایی معتبر، شناسایی شدند. برای شناسایی جدایه‌های بدون اسپور و بررسی صحت شناسایی‌های انجام شده بر اساس ویژگی‌های مورفولوژیک، شناسایی مولکولی و توالی نواحی ITS (ITS4 و ITS5 ) از DNA ریبوزومی انجام شد. سپس توالی ها با بانک ژن مقایسه گردید. در این تحقیق بترتیب چهار گونه‌ی قارچی Cladosporium tenuissimum، Purpureocillium lilacinum، Fusarium proliferatum و Lecanicillium sp. با ویژگی‌های اندازه کنیدی و کنیدیوفور، تیپ کنیدی مانند ماکروکنیدی و میکروکنیدی و کنیدی‌های دانه تسبیحی به عنوان قارچ‌های اندوفیت از گیاهان فوق شناسایی شدند. قارچ‌های فوق برای نخستین بار به عنوان قارچ‌های اندوفیت تیره خشخاش برای میکوفلور ایران و دنیا گزارش می‌شوند.
کلیدواژه ها
موضوعات
 
Title
قارچ‌های اندوفیت، تیره‌ی خشخاش، Papaver chelidoniifolium، Papaver pavoninum و Papaver rhoeas
Authors
yasaman tajik gharibi, Amir Zolfaghary, Afsaaneh graan
Abstract
Flor of medicinal plants papaveraceae family is very diverse and it is application in medicine industry too important. Endophytes are fungi that live within plant tissue without visible symptoms. The distinction of phytopathogenic fungi and symbiotic fungi is not clear and interaction between fungus and host plant is often variable. In order to identify the endophytic fungi from three species Papaver chelidoniifolium, Papaver pavoninum and Papaver rhoeas, samples were taken from stem node of healthy plants from different locations in Gorgan area, during the summer and autumn of 2017. Samples were surface sterilized with 70% ethanol (v/v) for 45 second, 1% sodium hypochlorite (v/v) for 30 second, and then washed three times with sterile distilled water. Samples were plated in potato dextrose agar culture medium and incubated at 25°C for 4 weeks. During this time, the fungi growing out of samples were isolated and purified by single spore and hyphal tip methods. In order to identify non-spore isolates and verify the authenticity of the findings based on morphological characteristics, molecular identification and sequencing of ITS regions (ITS4 and ITS5) from the ribosomal DNA were performed and then compared with GeneBank. In this study, 4 fungal species including Cladosporium tenuissimum, Purpureocillium lilacinum, Fusarium proliferatum and Lecanicillium sp. were respectively identified by conidia shape and their size, conidiophore, conidia type such as macroconidia and microconida as well as small conidia chains as endophytic fungi of Papaveraceae. This fungi are the first record of endophytic fungi from Papaveraceae in Iran and the world.
Keywords
Endophytic fungi, Papaveraceae, Papaver chelidoniifolium, Papaver pavoninum, Papaver rhoeas