شناسایی باکتری های اندوفیت موجود در پریدرم غده های سیب زمینی با روش 16SrRNA و بررسی توانایی آنها در ایجاد مقاومت علیه پاتوژن های خاکزاد
کد مقاله : 1810-23IPPC
نویسندگان
1کرج،سه راه دانشکده،خیابان دانشکده،پردیس کشاورزی و منابع طبیعی،گروه گیاه پزشکی
کدپستی: 77871-31587
2دانشگاه ازاد شیراز
3دانشگاه ازاد جهرم
چکیده
امروزه باکتری های اندوفیت به عنوان عوامل بیوکنترل میکروارگانیسم های بیماری زای گیاهی مطرح شده اند. هدف از این مطالعه، شناسایی باکتری های اندوفیت موجود در غده های سیب زمینی ارقام فونتان90، آگریا، سانته آ و جلی 89 با روش 16S rRNA و بررسی خاصیت آنتاگونیستی آنها در مقابل برخی عوامل بیمارگر خاکزاد می باشد. ابتدا غده های سیب زمینی در محیط PDA و TSA، پس از ضدعفونی با پاک کننده های تجاری جهت اطمینان از وجود هرگونه میکروارگانیسم، کشت سطحی داده شدند. پس از نمونه گیری از سه مجموعه پوست سیب زمینی به ضخامت یک میلی متر به طور متوالی از لایه خارجی به سمت مرکز برجستگی، لایه ها در سرم فیزیولوژی له شدند و پس از 45 دقیقه عصاره باکتری خارج شد. از این عصاره ، کشت سطحی داده و با روش های بیولوژیک (صفات مورفولوژیک، صفات فیزیولوژیک و صفات بیوشیمیایی) و روش های استاندارد میکروب شناسی، در حد جنس شناسایی شدند. پس از انجام تست آنتاگونیستی به روش کشت متقابل در مقابل Fusarium oxosporum، Rhizoctonia solani، Verticillium dahlia، Stereptomayse scabies و Ralstonia solanacearum، بهترین آنتاگونیست ها با تعیین توالی نوکلئوتیدی ژن 16S rRNA و مقایسه در بانک ژنی NCBI در حد گونه شناسایی شدند. نتایج به دست آمده نشان داد که بالاترین درجه بازدارندگی مربوط به جنس های Bacillus subtilis،Bacillus mojavensis و Klebsiella variicola و در لایه اول می باشد. تمامی آزمایشات با چهار تکرار صورت گرفت. در مورد باکتری Klebsiella variicola به عنوان اندوفیت غده های سیب زمینی، تا به حال گزارشی نشده است، که برای اولین بار در این تحقیق، استخراج و جداسازی آن صورت گرفت و به عنوان آنتاگونیست خوب در برابر بیمارگرهای قارچی و باکتریایی معرفی شد.
کلیدواژه ها
موضوعات
Title
Identification of Endophyte Bacteria in Potato Tubers with 16SrRNA Method and Their Ability to Create Resistance Against Soil-borne Pathogens
Authors
kowsar shirazi, saghar ketabchi, mohammad kargar
Abstract
Endophyte bacteria are now considered as biocontrol agents of plant pathogenic microorganisms. The aim of this study was to identify endophyte bacteria in potato tubers of Fontan 90, Agria, Sante,a and Jeli 89 by using 16S rRNA gene and investigate their antagonistic ability against some Soil-borne pathogens. First, potato tubers were planted in PDA and TSA medium, after sterilization with commercial cleaners to ensure any microorganisms. After sampling, three groups of potatoes with a skin thickness of 1mm were sampled successively from the outer skin towards the center of the excrescence's prominence. The layers of each type, with 1 mL sterile aquapura, were broken to pieces, and a 45 minute time was allowed in order for the bacteria excretions to go out. The extracts were surface cultured and identified by biological methods (morphological, physiological and biochemical attributes) and standard microbiology methods. The achieved antagonistic property of endophyte bacteria as compared to pathogene fungus like Fusarium oxosporum, Rhizoctonia solani, Verticillium dahlia, and pathogene bacteria like Stereptomayse scabies and Ralstonia solanacearum. The best antagonists were identified by 16S rRNA gene and comparing in the NCBI gene bank. The results showed that Bacillus subtilis, Bacillus mojavensis and Klebsiella variicola had the highest degree of inhibitory effect and was related to the 1st layer. All of the experiments were done with four repetitions. In the case of Klebsiella varicola as potato tuber endophyte, has been yet no reported, which was first extracted and isolated in this study and presented as a good antagonist against fungal and bacterial pathogens.
Keywords
endophytic bacteria, antagonist, Bacillus subtilis, Bacillus mojavensis, Klebsiella variicola