معرفی و ارزیابی قابلیت آنتاگونیستی باکتری Delftia acidovorans در برابر بیمارگر عامل آتشک سیب و گلابی و بلاست مرکبات
کد مقاله : 1770-23IPPC
نویسندگان
1کرمان-رفسنجان-میدان 22 بهمن-دانشگاه ولیعصر(عج) رفسنجان-گروه گیاهپزشکی
2گروه گیاهپزشکی-دانشکده علوم زراعی-دانشگاه علوم کشاورزی و منابع طبیعی ساری-مازندران-ایران
چکیده
بیماری آتشک گلابی با عامل Erwinia amylovora یکی از بیماری های خطرناک درختان میوه دانه دار در بسیاری از مناطق دنیاست که موجب نکروز شدن بافت های میزبان می گردد. علائم عمده بیماری شامل بلایت شکوفه ها، نکروز، سیاه شدگی و سرعصایی شدن سرشاخه ها می باشد. بلاست مرکبات با عامل Pseudomonas spp. از بیماری های مهم مرکبات در استان های شمالی کشور است که در شرایط اقلیمی مساعد خسارت های قابل توجهی به صورت پژمردگی و خشکیدگی سر شاخه ها به باغات مرکبات وارد می سازد. در این تحقیق، 100 جدایه اپی فیت از بافت شکوفه های سالم درختان دانه دار جداسازی و توانایی آن ها بر علیه باکتری عامل آتشک سیب و گلابی، E. amylovora ، عامل بلاست مرکبات P. syringae pv. syringae و P. viridiflava مورد بررسی قرار گرفت. ابتدا توانایی بیمارگری جدایه های عامل بیماری به اثبات رسید و اثر بازدارندگی آنتاگونیست ها با به کارگیری آزمون هاله بازدارنده (آنتی بیوز) و نشت در چاهک آگار (Agar-well Diffusion) نشان داد که گروهی از جدایه ها قابلیت بالایی در بازداری از رشد هر سه عامل بیماری دارند. جدایه های ایجاد کننده ی حداکثر قطر هاله بازداری، با استفاده از آزمون های فیزیولوژیک، بیوشیمیایی و مورفولوژیک مورد شناسایی قرار گرفتند. جدایههای دارای بیشترین توانایی بازداری از رشد، کروی شکل، گرم منفی، هوازی، اکسیداز و کاتالاز مثبت بودند. این جدایه ها در آزمون تولید بیوفیلم و ایندول استیک اسید(IAA) نیز موثر ارزیابی شدند. در بررسی امکان تولید بیوفیلم، میزان بالایی از جذب در طول موج 660 نانومتر بررسی شد که نشانگر توان بالای جدایه در تولید بیوفیلم بود. برای تکمیل شناسایی، بخشی از ناحیه 16s rDNA با به کارگیری یک جفت آغازگر عمومی (FD1,RD1) تکثیر و توالی آنها توسط شرکت (Macrogen, South Korea) تعیین گردید. مقایسه توالی با توالی های نواحی مشابه در ژن بانک(GenBank) نشان داد که توالی نوکلئوتیدی جدایهی یاد شده بالاترین شباهت (٪۹۸) را با توالی جدایههای Delftia acidovorans دارد. این اولین گزارش از جداسازی باکتری D. acidovorans با قابلیت بالقوه کنترل بیماری های آتشک سیب و گلابی و بلاست مرکبات در شرایط آزمایشگاهی است.
کلیدواژه ها
موضوعات
Title
Introduction and evaluation of the antagonistic potential bacteria of Delftia acidovorans against the pathogen agent of pome fruits and citrus blast.
Authors
Saman Firouzianbandpey, Heshmatollah Rahimian
Abstract
Fire Blight is one of the most dangerous diseases of pome fruits in many parts of the world. The main symptoms of the diseases include blossom blight, necrosis, blackening of petiole and necrosis and bending of twigs in a characteristic way forming the symptom known as "shepherd's crook". Citrus blast disease caused by Pseudomonas spp. is one of the most important citrus diseases in the northern citrus growing provinces of Iran due to the climate conditions which are conductive to its development significant damage in the form of twig and shoot dieback. In the present study one hundred isolates of epiphytic bacteria, were recovered from healthy-looking blossoms of pome fruits and tested for their ability to inhibit the growth of E. amylovora, the agent of fire blight and P. syringae pv. syringae and P. viridiflava the casual agents of citrus blast disease. The pathogenicity of these agents were proven at the start of the experiment. The ability of the antagonistic bacteria to inhibit growth of all three pathogen species was evaluated by using antibiosis test and agar-well diffusion test. The isolate which produce the widest inhibition halo were identified by physiological, biochemical and morphological tests. The isolates were rod shaped, gram negative and oxidase and catalase positive. The ability of the isolate to form Biofilm and to produce indole acetic acid (IAA) were evaluated. Biofilm formation by the microplate method showed high absorption at 660 nm which reflected the high ability of the isolates in production of Biofilm. A fragment of the 16s rDNA of a representative isolate was amplified by PCR using universal primer pairs (FD1,RD1) and sequenced by Macrogen co. (Macrogen, South Korea). The nucleotide sequence of the 16s rDNA gene of the isolate had more than 98% identity with those of Delftia acidovorans. this is the first report on isolation of D. acidovorans controlling possessing the potential to inhibit growth of the causal agents of fire blight and citrus blast disease under laboratory conditions.
Keywords
Antibiosis, Agar- well Diffusion, Biofilm, Indole Acetic Acid