گونه‌های Pseudonectria روی شمشاد در استان گیلان
کد مقاله : 1738-23IPPC
نویسندگان
1رشت، بزرگراه خلیج فارس، کیلومتر 5 جاده رشت-قزوین، دانشگاه گیلان، دانشکده کشاورزی، گروه گیاهپزشکی1159-41635
2گیلان، رشت، کیلومتر 5 بزرگراه خلیج فارس، دانشگاه گیلان، دانشکده علوم کشاورزی، گروه گیاهپزشکی
3گروه گیاهپزشکی، دانشکده علوم کشاورزی، دانشگاه گیلان، رشت، ایران
4رشت کیلومتر 5 جاده تهران دانشگاه گیلان
چکیده
شمشاد جنگلی (Buxus sempervirens subsp. hyrcana) از مهم‌ترین گونه‌های گیاهی همیشه‌سبز اختصاصی جنگل‌های حاشیه دریای خزر است. طی مطالعه‌ای که در سال‌های 1395-1396 در جنگل‌های شمشاد انجام شد، از نمونه‌های شمشاد جمع‌آوری شده با برگ‌های تغییر رنگ داده شده از رنگ سبز مایل به قرمز تا قهوه‌ای با اسپرودوکیوم‌های رشد کرده در سطح زیری برگ‌ها و ساقه‌ی آسیب دیده شمشاد گونه‌هایی از Pseudonectria جداسازی شد. جداسازی قارچ‌ها با روش‌های متعارف انجام و برای خالص‌سازی ایزوله‌ها از روش تک‌اسپور کردن در محیط کشت آب-آگار (WA) 2% استفاده شد. نمونه‌ها در محیط کشت سیب زمینی- دکستروز آگار (PDA) کشت داده شدند و در انکوباتور با دمای 25 درجه سانتیگراد تحت شرایط 12 ساعت روشنایی و 12 ساعت تاریکی قرار گرفتند. طی بررسی‌های مورفولوژیکی انجام شده دو گونه Pseudonectria شناسایی شدند. در P. buxi اسپرودوکیوم غیراستروماتیک، با اندازه 175-25×150-25 میکرومتر، به رنگ قرمز مایل به صورتی و دارای خارهای بی‌رنگ از پایه و اطراف اسپرودوکیوم با اندازه‌ی 5/5-3×180-80 میکرومتر است، که روی برگ‌های تازه مرده به طور مساوی پراکنده شده و به راحتی از سطح جدا می‌شود. کنیدیوم‌ها بیضی شکل با انتهای گرد با اندازه‌های 3-2×14-7 میکرومتر، شفاف، تک‌سلولی و صاف می‌باشند. میزان رشد قارچ پنج روز پس از کشت در محیط کشت سیب‌زمینی- دکستروز آگار (PDA) 9/0-8/0 سانتی‌متر به صورت میسلیوم‌های سفید پراکنده بوده، سپس بر اثر تولید کنیدیوم‌های لزج به رنگ صورتی کم‌رنگ در می‌آید. کنیدیوفورها به صورت مونوفیالید‌های منفرد تشکیل می‌شوند. در گونه دوم اسپرودوکیوم ها مشابه گونه اول، با اندازه متغیر 125-75× 275-5/62 میکرومتر بر روی سطح برگ، خارهای 8/4-4/2× 475-192 میکرومتر، کنیدیوم‌ها کوچک‌تر با اندازه 3-2×8-5 میکرومتر و با میزان رشد 3-7/1 سانتی‌متر می باشند و از این نظر از گونه فوق متمایز می‌شود. همچنین تکثیر و تعیین توالی ناحیه ITS این گونه‌ها انجام شد. توالی ناحیه ITS این گونه‌ها با توالی جدایه‌های موجود در بانک ژن جهت شناسایی قارچ مورد مقایسه قرار گرفت و در نهایت شناسایی مولکولی جدایه‌ها و رسم درخت فیلوژنتیک، شناسایی مورفولوژیکی گونه‌یP. buxi را تأیید نمود. بر این اساس اگرچه توالی ناحیه ITS گونه دوم فقط در یک نوکلئوتید با توالی گونه P. foliicola تفاوت داشت، اما در جدایه ایرانی اسپرودوکیوم‌ها برخلاف P. foliicola دارای خار می‌باشند. براساس منابع این اولین گزارش از وجود گونه‌های Pseudonectria برای میکوبیوتای ایران بوده و گونهP. buxi به عنوان عامل بلایت ولوتلایی شمشاد معرفی شده است.
کلیدواژه ها
موضوعات
Title
Pseudonectria species on boxwood in Guilan province
Authors
Seyyedeh Akram Mousavi, Sedigheh Mousanejad, Ahmad Rohibakhsh, seyed akbar Khodaparast
Abstract
Boxwood (Buxus sempervirens subsp. hyrcana) is one of the most important evergreen plant species of the forests in Caspian Sea region. During a study in boxwood forests from 2016 to 2017, some species of Pseudonectria were separated from specimens of boxwood with color changed leaves from reddish green to brown, sporodochium grown under the leafs and damaged boxwood branches. Isolation and purification of fungi was done based on conventional methods and single spore method on WA 2%. Isolates were subcultured on potato-dextrose agar (PDA) media and incubated at 25 °C under 12 hours light and 12 hours darkness. During the morphological studies, two species of Pseudonectria were identified. In P. buxi, sporodochia were nonstromatic, variable in size 25-150×25-175 µm, pink-red, with hyaline setae 80-180×3-5.5 µm, distributed on recently decayed leaves and were easily removed from the surface. Conidia were ellipsoid with rounded end, 7-14×2-3 µm, hyaline, aseptate and smooth. After 5 days on PDA media, colony was 0.8-0.9 cm as scattered white mycelium, then became pale due to the production of slimy conidia. Conidiophores were formed as single-monophiallides. In the second species, sporodochia were similar to the first species, with a variable size of 62.5-275 × 75-125 μm on the leaf surface, setae 192-475 × 2.4-4.8 μm, , producing smaller conidia 5-8×2-3 μm and with 1.7-3 cm growth after 5 days, and from this point of view, it was distinguished from the above species. Also replication and sequencing of the ITS region of these species were performed. The sequence of the ITS region of these species was compared with the sequence of isolates in the gene bank to identify the fungus. Finally, based on the molecular identification of the isolates and the phylogenetic tree, the morphological identification of P. buxi confirmed. Based on it, although the sequence of the ITS region of the second species was only different in one nucleotide sequence compared with P. foliicola, but in Iranian isolate in spite of P. foliicola, sporodochium had setae. In literatures this is the first report of the existence of Pseudonectria species from Iran and P. buxi has been introduced as the agent of Volutella blight of boxwood.
Keywords
blight, boxwood, Pseudonectria