شناسایی گروه‌های آناستوموزی ریزوکتونیا، اندوفیت گیاهان فلفل در استان آذربایجان‌غربی

کد مقاله : 1708-23IPPC
نویسندگان
1خیابان بداق سلطان- کوچه خطیبی- پلاک15
2گروه گیاهپزشکی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه ارومیه، ارومیه، ایران
چکیده
در این مطالعه و به منظور بررسی تنوع زیستی قارچ‌های اندوفیت گیاهان فلفل در استان آذربایجان‌غربی، گیاهان کاملاً سالم از نواحی مختلف تحت کشت این محصول جمع‌آوری شدند. جداسازی قارچ‌های اندوفیت از نمونه‌های گیاهی بلافاصله بعد از انتقال به آزمایشگاه انجام گرفت. ابتدا نمونه‌ها بطور کامل زیر شیر آب و به منظور حذف میکروارگانیسم‌های سطحی، شسته شدند. عمل ضدعفونی سطحی بافت‌ها با قرار دادن آن‌ها به ترتیب در اتانول 75 درصد به مدت یک دقیقه، هیپوکلریت سدیم 3 درصد به مدت دو دقیقه و اتانول 75 درصد به مدت 30 ثانیه انجام گرفت و بلافاصله نمونه‌ها 3 بار با آب مقطر سترون شسته شدند. قطعات کوچک از هر کدام از بافت‌های ضدعفونی شده ریشه، ساقه و برگ بریده شد و روی محیط‌های کشت PDA و PCA حاوی 100 پی‌پی‌ام از هرکدام از آنتی بیوتیک‌های سولفات استرپتومایسین و پنی‌سیلین جی کشت شدند. قارچ‌های رشد کرده از حاشیه بافت‌ها جداسازی و از طریق کشت نوک ریسه یا کشت تک هاگ خالص‌سازی شدند. در مجموع تعداد 18 جدایه با مشخصات جنس Rhizoctonia جداسازی گردید. رنگ‌آمیزی هسته‌ها با محلول رنگی سافرانین O انجام گرفت و جدایه‌ها در دو گروه ریزوکتونیای دو هسته‌ای و چند هسته‌ای قرار گرفتند. واکنش پیوند ریسه‌ای (آناستوموزی) بین جدایه‌ها انجام گرفت و در مجموع 3 گروه آناستوموزی تشخیص داده شد. از هر گروه یک جدایه انتخاب و ناحیه ITS-rDNA در آن‌ها تکثیر و توالی‌یابی گردید. گروه آناستوموزی 4 از گونه Rhizoctonia solani و گروه‌های آناستوموزی A و G از ریزوکتونیای دو هسته‌ای تشخیص داده شد. این اولین گزارش از گروه‌های آناستوموزی ریزوکتونیا به‌عنوان قارچ‌های اندوفیت گیاهان فلفل در ایران می‌باشد.
کلیدواژه ها
موضوعات
 
Title
Identification of anastomosis groups of Rhizoctonia, endophytes of pepper plants in west Azarbaijan
Authors
Ebrahim abdollahzade, Youbert Ghosta, Masoud Abrinbana
Abstract
In this study and in order to examine the biodiversity of endophytic fungi from pepper plants in west Azarbaijan province, healthy plants were collected from different growing locations in the studied area. Isolation of the fungi were done immediately after transferring the collected samples to the laboratory. Firstly, plant samples were washed thoroughly under tap water to remove surface microorganisms. Then, surface disinfection were done by dipping the samples respectively in 75% ethanol for one minute, 3% hypochlorite sodium for 2 min, 75% ethanol for 30 sec and finally were washed three times in sterile distilled water. Small pieces were cut separately from each of disinfected plant parts: root, stem and leaf and were placed in Petri plates containing potato dextrose agar (PDA) and potato carrot agar (PCA) media amended with 100 ppm of streptomycin sulfate and penicillin G antibiotics. Fungi growing out of plant samples were isolated and purified based on hyphal tip or single spore method. At all, 18 isolates with typical morphological characteristics of the genus Rhizoctonia were obtained. Nuclear staining were done with safranin O staining solution and isolates were grouped as multinucleate and/or binucleate Rhizoctonia. Anastomosis reaction was studied among the isolates and they were grouped in three anastomosis groups. In each group, an isolate was selected and ITS rDNA region was amplified and sequenced. Rhizoctonia solani AG-4, and anastomosis groups A and G from binucleate Rhizoctonia were identified. This is the first report of Rhizoctonia anastomosis groups as endophytic fungi from pepper plants in Iran.
Keywords
Endophytic fungi, ITS-rDNA, taxonomy, Biodiversity