گزارش دوگونه از خانواده Botryosphaeriaceae در نهالستانهای گیلان
کد مقاله : 1688-23IPPC
نویسندگان
1رشت کیلومتر 5 جاده تهران دانشگاه گیلان
2گیلان-رشت-بزرگراه خلیج فارس-کیلومتر پنج جاده قزوین-دانشگاه گیلان-دانشکده کشاورزی-گروه گیاهپزشکی
چکیده
طی نمونه‌برداری در نهالستانهای شرق استان گیلان که جهت بررسی قارچ های همراه با ریشه و طوقه صورت گرفت، نمونه های مشکوک به آلودگی به همراه خاک آنها به آزمایشگاه انتقال یافتند. در نتیجه این نمونه برداری‌ها دو گونه از خانواده Botryosphaeriaceae شناسایی شدند. به منظور جداسازی جنس Lasiodiplodia حدود دویست گرم از خاک گلدان مشکوک به آلودگی داخل ظرف کوچک قرار داده و کمی مرطوب شدند. سپس تعدادی چوب خلال دندان اتوکلاو شده و داخل ظرف‌های حاوی خاک در دمای اتاق قرار داده شدند. بعد از 3 تا 5 روز علایم بروز کردند.قطعات کوچکی از ناحیه آلوده برش داده و پس از ضدعفونی با هیپوکلریت سدیم 10 درصد به مدت 5/1 دقیقه درون تشتک پتری حاوی محیط کشت PDA کشت داده شدند و در دمای 25 درجه سانتی گراد درون ژرمیناتور قرار گرفتند. همچنین به منظور جداسازی جنس Neofusicoccum بعد از بررسی‌های ماکروسکوپی، قطعات کوچکی از طوقه و تنه در ناحیه مشکوک به آلودگی توسط هیپوکلریت سدیم 10 درصد به مدت 5/1 دقیقه ضدعفونی و درون تشتک پتری حاوی محیط کشت PDA کشت داده شدند. برای خالص‌سازی هر دو جنس از روش نوک ریسه استفاده شد. برای تشکیل پیکنیدیوم دو دیسک یک سانتی متری از کلنی خالص شده روی WA 2% قرار داده شدند و سوزن‌های کاج دوبار استریل روی دیسک‌ها قرار گرفتند. بعد از دو هفته پیکنید‌‌یوم‌ها روی سوزن کاج مشاهده شدند. طبق نتایج دو گونه Lasiodiplodia hormozganensis و Neofusicoccum parvum شناسایی شدند. در گونه Lasiodiplodia hormozganensis پارافیز شفاف، تقریباً استوانه‌ای، بدون دیواره تا دیواره‌دار و طول آن بیش از 43 میکرومتر و عرض آن 3-2 میکرومتر است. کنیدیوفور وجود ندارد. سلول کنیدیوم‌زا هلوبلاستیک، شفاف، استوانه‌ای و طول آن 12- 7 میکرومتر و عرض آن 5/3 – 2 میکرومتر است. کنیدیوم‌ها در ابتدا شفاف، صاف، یک سلولی، واژتخمرغی تا بیضوی هستند. کنیدیوم سپس قهواه‌ای، دوسلولی و دارای نوار های طولی در هنگام بلوغ هستند. کنیدیوم‌ها به طول 25- 20 میکرومتر و عرض 14- 11 میکرومتر هستند. رنگ کلنی در ابتدا سفید تا خاکستری سپس خاکستری تیره تا سیاه می‌شود. همچنین در گونه Neofusicoccum parvum کنیدیوم‌ها شفاف، یک سلولی و دارای دیواره جانبی نازک هستند. شکل این کنیدیوم‌ها دوکی تا بیضوی یا بیضوی نامنظم است. این کنیدیوم‌ها 23 - 16 میکرومتر طول و 5/5 – 4 میکرومتر عرض دارند. رنگ کلنی روی محیط PDA ابتدا سفید است سپس خاکستری تا سیاه می شود.
کلیدواژه ها
موضوعات
Title
Report of two Botryosphaeriaceae species from plantnurseriesin Guilan
Authors
seyed akbar Khodaparast, mahsa javan nikkhah
Abstract
For identification of fungal pathogens associated whit root and crown diseases in nurseries of the east of Guilan province, diseased plants and soil samples from nurseries suspected of being contaminated were transferred to the laboratory. According to the result, two species of the Botryosphaeriaceae were identified. For Lasiodiplodia hormozganensis, about 200 gr of contaminated pot soil was placed inside a small plastic dish and slightly was moistened. Then, a few autoclaved toothpick placed in containers containing soil at room temperature. After 3 to 5 days, symptoms appeared. Small pieces of the infected area disinfected with 10% sodium hypochlorite for 1.5 min, then were cultured on a Petri dishes containing PDA and placed in the germinator at 25 ° C. For Neofusicoccum parvum , after macroscopic examination, pieces of the crown and trunk of the suspected contaminated area were separated and sterilized by 10% sodium hypochlorite for 1.5 minutes and cultured in Petri dishes contains PDA. The hyphal tip method was used for purification of both genus. For observation of conidiogenesis, Petri dishes containing 2% WA with sterile pine needles inoculated with two disks of 1 cm diameter of fresh colony. After two weeks, the pycnidia were formed on the pine needle. According to the results, two species of Lasiodiplodia hormozganensis and Neofusicoccum parvum were identified. In L. hormozganensis, the paraphyses were hyaline, almost cylindrical, aseptate, with more than 43 micrometers length and 2-3 micrometers width. Conidiophores are absent. Conidiogenus cells were hyaline, cylindrical and 12-7 μm length and 3-3.5 μm width. The conidia were initially hyaline, smooth, one cell, obovoid to ellipsoid, become brown, 2-septate and with longituidal striation in the maturity, 20-25 μm in length and 14 to 11 μm in width. In Neofusicoccum parvum conidia were hyaline, 1-septate thick-wall, fusiform to ellipsoial to irregular ellipsoid. These conidia are 16 to 23 μm in length and 4 to 5/5 μm in width.
Keywords
Key words: Botryosphaeriaceae, Neofusicoccum, Lasiodiplodia